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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手提RNA，电泳图看不懂
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 鼓励应助 2011-12-26 12:02:18
wanhscn(金币+2): 鼓励应助 2011-12-26 12:02:24
1%的胶，100V，15分钟差不多吧。Maker还是要点的，出了问题可以帮忙分析原因。Loading buffer随便点一点就行了，木有问题的哈
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11楼2011-12-26 11:46:15
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雪之恋

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 材料处理，RNA提取，电泳，每一步都可能发生降解 2011-12-28 12:50:51
是不是应该考虑一下原材料新鲜度问题，以前我从牛的内脏中提RNA，也一直是这个结果，实验重复了一个月，才发现是原材料不新鲜导致的RNA降解严重，一般实验过程中导致的RNA降解不会这么严重。
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12楼2011-12-26 21:57:52
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 180V确实偏高了。测OD是好方法，本人现在都直接测OD省略电泳了。 2011-12-28 12:52:32
RNA电泳不宜跑太高的电压，毕竟不是PCR产物。这个在每个实验室都会有个经验值的，多问问，或者自己多摸索一下。
然后上样之前，对RNA定量一下，很方便的，用NanoDrop，1-2uL就可以了，同时还可以看出你的RNA的质量如何。这方面的资料很多了，你上网随便搜搜就找得到的。做实验之前，要把这些原理和方法多了解，然后设计和计划一下实验怎么做，这样实验的效率也就高多了。
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走进你，温暖我，迷失于这个世界！
13楼2011-12-27 08:29:15
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lw19850128

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的感觉应该是降解了，5S那一坨太亮了，不太正常，另外每次都点个marker，有用
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14楼2011-12-27 09:44:42
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小小亚杰

木虫 (正式写手)
过来学习了
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15楼2011-12-27 09:52:54
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 虽然低电压跑久点会好看，但是为了避免降解，RNA电泳时间不宜太长~ 2011-12-28 12:53:47
和你的电泳槽大小有关系的，电泳槽越宽，所需的电压越大，看一下你的电泳槽规格，计算一下，大约5v/cm就可以了，还有跑慢点会比较漂亮
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16楼2011-12-27 10:41:26
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 提取和电泳过程都可能降解 2011-12-28 12:54:03
我觉得基本上就是ＲＮＡ没有提好，跟电泳条件关系并不大。
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17楼2011-12-27 20:41:00
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遇见之殇

金虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-28 12:54:16
跑成这样和电泳条件关系不大，RNA基本降解了，提取的过程注意条件，尽量快得完成各个步骤。还有，建议更换各试剂，很可能有试剂污染，祝你好运！
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18楼2011-12-28 00:39:32
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huocao

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-12-26 11:46:15
1%的胶，100V，15分钟差不多吧。Maker还是要点的，出了问题可以帮忙分析原因。Loading buffer随便点一点就行了，木有问题的哈

你好 看到你回复的若干帖子 非常仔细  谢谢你的解答 我也是开始做分子实验的新手 希望以后遇到问题能得到你的解惑 谢谢
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会迷茫 会困惑 但我相信自己温暖的力量 我最大的梦想是我的生活里住着爱我的我爱的我的爱人 为了遇到这个他 而不断努力
19楼2012-12-23 21:38:56
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