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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 鼓励应助 2011-12-26 12:02:18
wanhscn(金币+2): 鼓励应助 2011-12-26 12:02:24
1%的胶,100V,15分钟差不多吧。Maker还是要点的,出了问题可以帮忙分析原因。Loading buffer随便点一点就行了,木有问题的哈
11楼2011-12-26 11:46:15
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雪之恋

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 材料处理,RNA提取,电泳,每一步都可能发生降解 2011-12-28 12:50:51
是不是应该考虑一下原材料新鲜度问题,以前我从牛的内脏中提RNA,也一直是这个结果,实验重复了一个月,才发现是原材料不新鲜导致的RNA降解严重,一般实验过程中导致的RNA降解不会这么严重。
12楼2011-12-26 21:57:52
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 180V确实偏高了。测OD是好方法,本人现在都直接测OD省略电泳了。 2011-12-28 12:52:32
RNA电泳不宜跑太高的电压,毕竟不是PCR产物。这个在每个实验室都会有个经验值的,多问问,或者自己多摸索一下。
然后上样之前,对RNA定量一下,很方便的,用NanoDrop,1-2uL就可以了,同时还可以看出你的RNA的质量如何。这方面的资料很多了,你上网随便搜搜就找得到的。做实验之前,要把这些原理和方法多了解,然后设计和计划一下实验怎么做,这样实验的效率也就高多了。
走进你,温暖我,迷失于这个世界!
13楼2011-12-27 08:29:15
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lw19850128

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我的感觉应该是降解了,5S那一坨太亮了,不太正常,另外每次都点个marker,有用
14楼2011-12-27 09:44:42
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小小亚杰

木虫 (正式写手)

过来学习了
15楼2011-12-27 09:52:54
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

★ ★
西瓜(金币+2): 虽然低电压跑久点会好看,但是为了避免降解,RNA电泳时间不宜太长~ 2011-12-28 12:53:47
和你的电泳槽大小有关系的,电泳槽越宽,所需的电压越大,看一下你的电泳槽规格,计算一下,大约5v/cm就可以了,还有跑慢点会比较漂亮
16楼2011-12-27 10:41:26
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)


西瓜(金币+1): 提取和电泳过程都可能降解 2011-12-28 12:54:03
我觉得基本上就是RNA没有提好,跟电泳条件关系并不大。
17楼2011-12-27 20:41:00
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遇见之殇

金虫 (小有名气)

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-28 12:54:16
跑成这样和电泳条件关系不大,RNA基本降解了,提取的过程注意条件,尽量快得完成各个步骤。还有,建议更换各试剂,很可能有试剂污染,祝你好运!
18楼2011-12-28 00:39:32
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huocao

新虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-12-26 11:46:15
1%的胶,100V,15分钟差不多吧。Maker还是要点的,出了问题可以帮忙分析原因。Loading buffer随便点一点就行了,木有问题的哈

你好 看到你回复的若干帖子 非常仔细  谢谢你的解答 我也是开始做分子实验的新手 希望以后遇到问题能得到你的解惑 谢谢
会迷茫 会困惑 但我相信自己温暖的力量 我最大的梦想是我的生活里住着爱我的我爱的我的爱人 为了遇到这个他 而不断努力
19楼2012-12-23 21:38:56
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