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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-12-26 11:44:04
zhouxw1987(金币+2): ★★★很有帮助 2011-12-27 20:30:11
首先你上样量肯定有点多相对你此胶的点样孔来说。你小孔的胶先测一下OD,上200-300ng就可以了,上多了就会跑成这样。
其次你的电泳可能有点大,10min跑了那么远,一般要了20-25min才能跑这样的距离。电压是以几伏每厘米来说的,不是以电泳仪显示的总电压来说。电泳槽有10cm\20cm\30cm等等的规格,如果你是180v,则分别为18v/cm,9v/cm,6v/cm了,完全不同的概念。
最后,你的loading如果不是你点多了就是你的二甲苯青和溴酚兰加多了,多到都有点影响判断条带了。6Xloading 你就按1:5跟你的样品混混上就行了。新手最好也点个marker(DL2000)
伟大航线....
6楼2011-12-26 09:28:38
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

haiven

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 180V确实偏高了。测OD是好方法,本人现在都直接测OD省略电泳了。 2011-12-28 12:52:32
RNA电泳不宜跑太高的电压,毕竟不是PCR产物。这个在每个实验室都会有个经验值的,多问问,或者自己多摸索一下。
然后上样之前,对RNA定量一下,很方便的,用NanoDrop,1-2uL就可以了,同时还可以看出你的RNA的质量如何。这方面的资料很多了,你上网随便搜搜就找得到的。做实验之前,要把这些原理和方法多了解,然后设计和计划一下实验怎么做,这样实验的效率也就高多了。
走进你,温暖我,迷失于这个世界!
13楼2011-12-27 08:29:15
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