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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手提RNA，电泳图看不懂
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-26 11:44:04
zhouxw1987(金币+2): ★★★很有帮助 2011-12-27 20:30:11
首先你上样量肯定有点多相对你此胶的点样孔来说。你小孔的胶先测一下OD，上200-300ng就可以了，上多了就会跑成这样。
其次你的电泳可能有点大，10min跑了那么远，一般要了20-25min才能跑这样的距离。电压是以几伏每厘米来说的，不是以电泳仪显示的总电压来说。电泳槽有10cm\20cm\30cm等等的规格，如果你是180v，则分别为18v/cm,9v/cm,6v/cm了，完全不同的概念。
最后，你的loading如果不是你点多了就是你的二甲苯青和溴酚兰加多了，多到都有点影响判断条带了。6Xloading 你就按1：5跟你的样品混混上就行了。新手最好也点个marker（DL2000）
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伟大航线....
6楼2011-12-26 09:28:38
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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 180V确实偏高了。测OD是好方法，本人现在都直接测OD省略电泳了。 2011-12-28 12:52:32
RNA电泳不宜跑太高的电压，毕竟不是PCR产物。这个在每个实验室都会有个经验值的，多问问，或者自己多摸索一下。
然后上样之前，对RNA定量一下，很方便的，用NanoDrop，1-2uL就可以了，同时还可以看出你的RNA的质量如何。这方面的资料很多了，你上网随便搜搜就找得到的。做实验之前，要把这些原理和方法多了解，然后设计和计划一下实验怎么做，这样实验的效率也就高多了。
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走进你，温暖我，迷失于这个世界！
13楼2011-12-27 08:29:15
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