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zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 新手提RNA，电泳图看不懂

今天第一次提RNA，用普通琼脂糖凝胶1.6%，电压为180V，跑了电泳图，看不懂是啥意思，最下面那个很亮的地方是什么东西？是降解了么？但是又不像是拖带啊？请各位前辈指点指点，能用此RNA做反转录么？万分感谢！

图一、电泳5min时的图片

图二、电泳10min时的图片

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1楼 2011-12-25 20:20:16

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longrna

新虫 (正式写手)

MolEPI: 7
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-26 11:44:04
zhouxw1987(金币+2): ★★★很有帮助 2011-12-27 20:30:11

首先你上样量肯定有点多相对你此胶的点样孔来说。你小孔的胶先测一下OD，上200-300ng就可以了，上多了就会跑成这样。
其次你的电泳可能有点大，10min跑了那么远，一般要了20-25min才能跑这样的距离。电压是以几伏每厘米来说的，不是以电泳仪显示的总电压来说。电泳槽有10cm\20cm\30cm等等的规格，如果你是180v，则分别为18v/cm,9v/cm,6v/cm了，完全不同的概念。
最后，你的loading如果不是你点多了就是你的二甲苯青和溴酚兰加多了，多到都有点影响判断条带了。6Xloading 你就按1：5跟你的样品混混上就行了。新手最好也点个marker（DL2000）

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伟大航线....

6楼2011-12-26 09:28:38

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longrna

新虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励完整应助 2011-12-27 21:21:39

基因组DNA 0.6% gel  4-5v/cm  gDNA大，要慢慢跑出来才漂亮。
1-5kb DNA  1%gel    5-8v/cm 随便跑跑即可
200-500bp  2%       约6v/cm 问题不大。

至于RNA电泳（普通琼脂糖，非变性），因为怕它电泳时间过长，降解，所以感觉上电泳时间控制在30min以内会比较好。
1-1.5%的胶都有人用， 7v/cm左右差不多，在溴酚兰跑出来1-2cm。不同大小的点样孔上不同的量（小孔建议200ng）
多跑几次自己摸索摸索，找出自己最适合的条件。

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伟大航线....

9楼2011-12-26 11:21:06

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