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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌RNA提取后跑电泳出现一条暗带和在泳道中弥散都是什么原因？
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可可-LZW

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌RNA提取后跑电泳出现一条暗带和在泳道中弥散都是什么原因？

之前提取细菌的RNA都能看到3条条带，但是前几次提取后跑胶，只在2000以下的地方有比较宽的黑色条带，没有亮的条带；这几天提取后能看见有亮的在泳道中，并且是maker跑得范围内，但是呈弥散状态，看不见是一条条的条带，OD260/OD280为1.3-1.5，浓度在280-460ug/ml（如果要做后续的实验，需要500ug/ml以上，有什么方法增大RNA的浓度吗？），有人说是蛋白或酚污染，但是经过这么多次的提取，该注意的应该还挺小心的，并且多次出现这两种情况，应该不是偶然，但是现在就是找不到原因了，希望有类似经历的大侠给予指点！提RNA提不出来，还找不到原因的痛苦你懂的！多谢各位了！
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1楼 2011-11-23 10:07:52
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longrna

新虫 (正式写手)
描述抵不过一张电泳图。。。建议LZ贴个电泳图上来
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伟大航线....
2楼2011-11-23 10:50:59
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

西瓜: 500ug/uL很难吧……沉淀不能用75%酒精的，要用就用100%的，75%是漂洗用，沉淀效果不好滴。 2011-11-23 20:32:49
应该是500ug/ul吧。你可以跑电泳时用Mops胶跑，建议吸出2ul加点DEPC水稀释一下再跑。想增加浓度你就在用75%酒精沉淀一下，离心，沉淀风干后加少量的DEPC水。
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hehe
3楼2011-11-23 12:55:18
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-11-23 20:33:55
500ng/ul(=500ug/ml)，肯定做不到500ug/ul
浓缩的办法可以用异丙醇或无水乙醇再沉淀，然后用小体积的DEPC水溶解，不过操作要谨慎，否则容易降解。另外，毕竟是再沉淀，产量会有所损失。
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伟大航线....
4楼2011-11-23 13:59:24
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可可-LZW

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-23 10:50:59:
描述抵不过一张电泳图。。。建议LZ贴个电泳图上来

谢谢~

弥散



最开始提取时，跑胶图片。



无亮带
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5楼2011-11-24 10:43:02
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可可-LZW

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by longrna at 2011-11-23 13:59:24:
500ng/ul(=500ug/ml)，肯定做不到500ug/ul
浓缩的办法可以用异丙醇或无水乙醇再沉淀，然后用小体积的DEPC水溶解，不过操作要谨慎，否则容易降解。另外，毕竟是再沉淀，产量会有所损失。

我是用试剂盒里的柱子吸附再用乙醇和异丙醇反复洗，在操作过程中看不到沉淀的，因为原来是能够提取出来的，所以我觉得应该不是方法的问题。还有，如果说用少量的水溶解指的是多少呢？谢谢你了~
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6楼2011-11-24 10:51:00
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-11-24 22:04:21
可可-LZW(金币+1): Thank you ~ 2011-11-25 10:12:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by 可可-LZW at 2011-11-24 10:51:00:
我是用试剂盒里的柱子吸附再用乙醇和异丙醇反复洗，在操作过程中看不到沉淀的，因为原来是能够提取出来的，所以我觉得应该不是方法的问题。还有，如果说用少量的水溶解指的是多少呢？谢谢你了~

什么叫用柱子吸附再用乙醇和异丙醇洗？？？一般用试剂盒的柱子吸附不是试剂盒本身有洗液的吗？

原来提得出来现在不一定提的出来。
用少量的水溶解指的是：
就是说你得到一团在管底的RNA沉淀，用75%乙醇洗过然后干燥，你可以加入1ml DEPC水溶解该团沉淀，假设得到10ng/ul的RNA 。而你也可以加入10ul DEPC水溶解该团沉淀，得到的是1000ng/ul 的RNA，视你所需浓度而定。 you like
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伟大航线....
7楼2011-11-24 15:28:53
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ruoxi109

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 可可-LZW at 2011-11-24 10:43:02
谢谢~

弥散

最开始提取时，跑胶图片。

无亮带
...

楼主找到什么原因了吗，我的结果和你的一样，无亮带
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8楼2013-06-26 19:45:45
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莫祖英

新虫 (初入文坛)
提的浓度过低就没有亮带出，可是尝试不用试剂盒提
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9楼2014-04-12 22:06:42
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 可可-LZW at 2011-11-24 10:43:02
谢谢~

弥散

最开始提取时，跑胶图片。

无亮带
...

量少了点，样不是很纯，第一次抽提时多用点心思会好点

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2014-04-12 22:51:25
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