应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取的一些问题，请大家帮忙回答
141/2返回列表12下一页
查看: 3943  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

cjzyfx

木虫 (正式写手)

[求助] RNA 提取的一些问题，请大家帮忙回答

1 RNA提取的时候怎么样有效的避免DNA的污染？
2 RNA提取后在-20放置，可保存多久？
3 大家用的trizol是自己配的还是买的？
谢谢啊
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物信息学软件应用 【分子生物】EPI帖 分子实验技术收集

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
迷茫的蚊子
1楼 2012-02-14 17:00:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3, MolEPI+1): 鼓励发帖交流！ 2012-02-14 19:55:16
cjzyfx(金币+1): ★★★★★最佳答案 谢谢，很详细 2012-02-15 18:03:48
1、在提取过程增加DNase消化步骤。除使用酶消化外的方法去DNA都不是很彻底。视后续实验而定。
2、如有条件最好放-80保存。主要担心是如果提得不纯（有杂质或未完全灭活的RNase）在-20度保存过程中降解。且这个保存时间跟物种、提取方法等有关。尝试过有些物种的RNA放-20度保存一个月后出现降解的情况（未知是提得不纯或物种原因）
3、实验要求不高可以自己配点Trizol来提，如果重要的实验建议还是购买invitrogen的。
赞一下(3人) 回复此楼
伟大航线....
2楼2012-02-14 17:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

常小晶

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-15 11:04:18
动作要快，避免空气中，皮肤中以及呼吸中的RNA酶。加氯仿时应充分震荡使其充分乳化。组织样品应保持新鲜。RNA样品长时间反复使用可以-20保存，但是易降解。建议分装小管后保存-80。Trizol试剂购自Takara公司
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-02-15 01:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

muzihai

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2012-02-14 19:55:24
我之前提取过RNA,鼠肺组织的，关键是避免污染，所用TRIZOL买的是天根试剂公司的，感觉还可以，当然跟你的提取方法还有所用材料有关。提完最好放-80保存，可以存放久一点。至于用DNA酶处理我没有使用，提取质量还可以。
赞一下 回复此楼
没有过不去的事情，只有过不去的心情！
3楼2012-02-14 18:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

paco120

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励 2012-02-15 22:23:57
在提取RNA时最好所用的所有器械都要经过DEPC水过夜处理，实验平台和仪器不能和做NDA的混用，最好要有专用的RNA操作实验平台。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-14 18:23:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

julietguo

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 同意！一般提到RNA都马上做反转录，得到cDNA就稳定多了。 2012-02-15 22:24:41
我们实验室一般都是把提取的RNA逆转成cDNA后，在放在-80°C，这样可以保存的久一点；Trizol是Takara公司的。
赞一下 回复此楼
6楼2012-02-15 09:08:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

character

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-15 11:09:35
抽提RNA时用酸酚抽两遍也可以减少DNA的污染。继而后续用DNAaseI处理时比较容易除干净
赞一下 回复此楼
7楼2012-02-15 11:06:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虔诚的求学

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good！ 2012-02-15 22:25:01
同意5楼观点，逆转录成cDNA再保存方便一点，有条件的话当然是买现成的，RNA酶处理过的枪头，trizol的话目的有二，一是抑制RNA酶的活性，二是使蛋白质变性并溶解，里面成分的量会对效果有影响，而且既然是能使蛋白变性的东西，对人体也是有毒的，所以能买尽量买吧。
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-15 11:40:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2012-02-15 22:25:18
1.RNA提取注意事项很多，但都是一个目的：放置降解和杂质干扰，特别是降解。相关仪器的DEPC处理自不必说，还有操作台面以及移液器的75%乙醇擦拭、研钵的180度处理，再就是操作者的口罩手套防护，操作过程的低温保持等等。
2. 提取的RNA我从来不放到-20度，除非几分钟之后马上进行下面的操作，避免反复冻融。倒是有一次一个同学勿放到-20度约一个月，基本不能用了。
3. Trizol都是买的，一直用的宝生物，好像很可以。
赞一下 回复此楼
9楼2012-02-15 11:52:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sweetgirl

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 直接买RNA酶-free的省时很多，也不贵 2012-02-15 22:25:53
我们提RNA时用的离心管都是买的经过DEPC睡处理后无RNA酶的，在生物通风柜中戴口罩手套进行操作，trizol是买的Takara公司的。RNA提取出来后一般都不直接这样子保存在-20，都是反转录成cDNA后保存在-80里的。
赞一下 回复此楼
10楼2012-02-15 15:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cjzyfx 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 东南大学364求调剂 +3 JasonYuiui 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:57 by 无际的草原
[考研] 326求调剂 +3 上岸的小葡 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:50 by 无际的草原
[考研] 309求调剂 +4 花与叶@ 2026-03-10 4/200 2026-03-14 21:26 by a不易
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学，英一数二305分求调剂，四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 7/350 2026-03-13 17:28 by xujiaoszu
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭