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cjzyfx

木虫 (正式写手)

[求助] RNA 提取的一些问题，请大家帮忙回答

1 RNA提取的时候怎么样有效的避免DNA的污染？
2 RNA提取后在-20放置，可保存多久？
3 大家用的trizol是自己配的还是买的？
谢谢啊
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迷茫的蚊子
1楼 2012-02-14 17:00:11
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回帖置顶 ( 共有1个 )

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3, MolEPI+1): 鼓励发帖交流！ 2012-02-14 19:55:16
cjzyfx(金币+1): ★★★★★最佳答案 谢谢，很详细 2012-02-15 18:03:48
1、在提取过程增加DNase消化步骤。除使用酶消化外的方法去DNA都不是很彻底。视后续实验而定。
2、如有条件最好放-80保存。主要担心是如果提得不纯（有杂质或未完全灭活的RNase）在-20度保存过程中降解。且这个保存时间跟物种、提取方法等有关。尝试过有些物种的RNA放-20度保存一个月后出现降解的情况（未知是提得不纯或物种原因）
3、实验要求不高可以自己配点Trizol来提，如果重要的实验建议还是购买invitrogen的。
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伟大航线....
2楼2012-02-14 17:49:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

常小晶

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-15 11:04:18
动作要快，避免空气中，皮肤中以及呼吸中的RNA酶。加氯仿时应充分震荡使其充分乳化。组织样品应保持新鲜。RNA样品长时间反复使用可以-20保存，但是易降解。建议分装小管后保存-80。Trizol试剂购自Takara公司
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5楼2012-02-15 01:51:57
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普通回帖

muzihai

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2012-02-14 19:55:24
我之前提取过RNA,鼠肺组织的，关键是避免污染，所用TRIZOL买的是天根试剂公司的，感觉还可以，当然跟你的提取方法还有所用材料有关。提完最好放-80保存，可以存放久一点。至于用DNA酶处理我没有使用，提取质量还可以。
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没有过不去的事情，只有过不去的心情！
3楼2012-02-14 18:19:59
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paco120

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励 2012-02-15 22:23:57
在提取RNA时最好所用的所有器械都要经过DEPC水过夜处理，实验平台和仪器不能和做NDA的混用，最好要有专用的RNA操作实验平台。
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4楼2012-02-14 18:23:33
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julietguo

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 同意！一般提到RNA都马上做反转录，得到cDNA就稳定多了。 2012-02-15 22:24:41
我们实验室一般都是把提取的RNA逆转成cDNA后，在放在-80°C，这样可以保存的久一点；Trizol是Takara公司的。
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6楼2012-02-15 09:08:47
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character

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-15 11:09:35
抽提RNA时用酸酚抽两遍也可以减少DNA的污染。继而后续用DNAaseI处理时比较容易除干净
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7楼2012-02-15 11:06:33
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虔诚的求学

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good！ 2012-02-15 22:25:01
同意5楼观点，逆转录成cDNA再保存方便一点，有条件的话当然是买现成的，RNA酶处理过的枪头，trizol的话目的有二，一是抑制RNA酶的活性，二是使蛋白质变性并溶解，里面成分的量会对效果有影响，而且既然是能使蛋白变性的东西，对人体也是有毒的，所以能买尽量买吧。
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8楼2012-02-15 11:40:30
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2012-02-15 22:25:18
1.RNA提取注意事项很多，但都是一个目的：放置降解和杂质干扰，特别是降解。相关仪器的DEPC处理自不必说，还有操作台面以及移液器的75%乙醇擦拭、研钵的180度处理，再就是操作者的口罩手套防护，操作过程的低温保持等等。
2. 提取的RNA我从来不放到-20度，除非几分钟之后马上进行下面的操作，避免反复冻融。倒是有一次一个同学勿放到-20度约一个月，基本不能用了。
3. Trizol都是买的，一直用的宝生物，好像很可以。
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9楼2012-02-15 11:52:15
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Sweetgirl

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 直接买RNA酶-free的省时很多，也不贵 2012-02-15 22:25:53
我们提RNA时用的离心管都是买的经过DEPC睡处理后无RNA酶的，在生物通风柜中戴口罩手套进行操作，trizol是买的Takara公司的。RNA提取出来后一般都不直接这样子保存在-20，都是反转录成cDNA后保存在-80里的。
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10楼2012-02-15 15:20:29
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