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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA提取的几个问题~~~
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)

[求助] 关于RNA提取的几个问题~~~

最近在RNA的提取过程中遇到了几个问题，希望得到各位大虾的帮助~~~
1.我提取的RNA电泳出来有18s,28s两条带。但是用分光测出来的结果260/280只有1.5左右，这是个神马情况呢？
2.我之前提取的RNA260/280有2.1左右，RNA含量差不多是300 ng/uL左右。可是现在提取的RNA260/280一般都是1.7~1.8，含量只有90 ng/uL左右。RNA提取过程中能注意的我都注意了。实在是不知道为什么会这样。

我提取的是植物植株的RNA，用的是天根的离心柱式植物总RNA提取试剂盒~~~
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1楼 2013-07-09 09:19:46
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回帖置顶 ( 共有2个 )

zhouking8758

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励新虫交流 2013-07-09 12:52:13
1949stone: 回帖置顶 2013-07-10 08:37:56
sstefsun0630: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-12 14:28:27
电泳跑胶结果估算值与检测值相差大吗？
A260/A280的结果除了与RNA或DNA纯度有关，还与提取溶液中的蛋白以及其他有机物等均有关。
不知道楼主洗脱液用的是什么？
另外，柱子的质量对比值也有一定的影响。
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3楼2013-07-09 11:54:44
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2013-07-10 08:37:44
天根的试剂盒,出问题比较多的有两个地方,一个是裂解液,还有一个是酚.如果裂解液你每次都是整瓶加热的话,可能用了几次以后,再用效果就不好了.另外就是那瓶酚,有的时候他们的饱和酚感觉上面的水封做的不好,用着用着就不好用了.你可以换个新的试剂盒看看.
另外,一般的洗脱液就是TE, tris(10mm)和EDTA(1mm),你要是担心这个有问题,自己用RNase free水洗脱液可以.
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7楼2013-07-09 15:25:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouking8758 at 2013-07-09 11:54:44
电泳跑胶结果估算值与检测值相差大吗？
A260/A280的结果除了与RNA或DNA纯度有关，还与提取溶液中的蛋白以及其他有机物等均有关。
不知道楼主洗脱液用的是什么？
另外，柱子的质量对比值也有一定的影响。

额~~~脑抽了，最后一个问题当我没问~~~
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8楼2013-07-09 21:37:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-09 12:52:20
sstefsun0630: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-12 14:29:20
A260/280偏低一般是蛋白杂质污染造成的。一般用盒子提主要注意提取样品的生物量不宜太多或者太少，否则影响破碎效果和纯度。提植物的RNA不要用太老的样品。
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4楼2013-07-09 12:11:21
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普通回帖

sstefsun0630

金虫 (小有名气)
各位大神，求指点~~~
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2楼2013-07-09 11:31:18
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouking8758 at 2013-07-09 11:54:44
电泳跑胶结果估算值与检测值相差大吗？
A260/A280的结果除了与RNA或DNA纯度有关，还与提取溶液中的蛋白以及其他有机物等均有关。
不知道楼主洗脱液用的是什么？
另外，柱子的质量对比值也有一定的影响。

蛋白质的话，我电泳的点样孔在紫外下看不到荧光~~应该是没有太多蛋白质的杂质吧~~~
洗脱液因为用的试剂盒，具体的成分不太清楚是什么。
另外，弱弱的问一下，电泳跑胶的估算值是怎么个估算法呢？还有柱子的质量对比值是什么呢？
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5楼2013-07-09 14:48:55
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-09 12:11:21
A260/280偏低一般是蛋白杂质污染造成的。一般用盒子提主要注意提取样品的生物量不宜太多或者太少，否则影响破碎效果和纯度。提植物的RNA不要用太老的样品。

我的植物还是比较年轻的小苗~~~前几天有一次我提的RNA不论是A260/280还是电泳都特别好（取样品量和以前没什么区别）。跟以前唯一不同的是漂洗液是现用现配的，不知道跟这个有关系没有~不过这几次又恢复老样子了。愁~~~
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6楼2013-07-09 15:07:20
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-09 15:25:20
天根的试剂盒,出问题比较多的有两个地方,一个是裂解液,还有一个是酚.如果裂解液你每次都是整瓶加热的话,可能用了几次以后,再用效果就不好了.另外就是那瓶酚,有的时候他们的饱和酚感觉上面的水封做的不好,用着用着就 ...

加裂解液后我都没有加热过，都是剧烈摇晃然后就直接离心了。实验室的其他同学都是这么做的，也没有出现我这个问题~唉~~我这个试剂盒没有酚。
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9楼2013-07-09 21:49:42
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-09 15:25:20
天根的试剂盒,出问题比较多的有两个地方,一个是裂解液,还有一个是酚.如果裂解液你每次都是整瓶加热的话,可能用了几次以后,再用效果就不好了.另外就是那瓶酚,有的时候他们的饱和酚感觉上面的水封做的不好,用着用着就 ...

加裂解液后我都没有加热过，都是剧烈摇晃然后就直接离心了。实验室的其他同学都是这么做的，也没有出现我这个问题~唉~~我这个试剂盒没有酚。
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10楼2013-07-09 21:50:12
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