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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母RNA提取问题
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huangzhenjie

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母RNA提取问题

最近连续几次提了酿酒酵母的RNA（用液氮研磨， ambion 和roche的TRIzol 提），为什么电泳跑出来有四、五条条带（见下图）。到底哪三条才是RNA？其他的条带都是DNA污染吗？这样的能用来做反转录和QPCR吗？急需帮助，谢谢各位！

rna
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1楼2012-05-28 22:53:52
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-05-29 18:51:40
上面两条是DNA污染，这样的话不建议进行下一步实验，你可以去一下DNA再往后面做
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上班族，学习ing……
2楼2012-05-29 08:37:01
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huangzhenjie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-05-29 08:37:01
上面两条是DNA污染，这样的话不建议进行下一步实验，你可以去一下DNA再往后面做

嗯，那请问加DNase I (RNase free)去DNA的具体步骤是怎样的，好像最后要加EDTA终止反应，那EDTA对后面的反转录酶没影响吗？谢谢！
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3楼2012-05-29 15:40:19
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huangzhenjie at 2012-05-29 15:40:19
嗯，那请问加DNase I (RNase free)去DNA的具体步骤是怎样的，好像最后要加EDTA终止反应，那EDTA对后面的反转录酶没影响吗？谢谢！...

你买的酶会有使用说明，不同公司的酶应该不一样吧，我们用的宝公司的酶，后面也是用的EDTA终止反应，对后面的反转录没有影响。
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上班族，学习ing……
4楼2012-06-01 16:35:36
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-05-29 08:37:01
上面两条是DNA污染，这样的话不建议进行下一步实验，你可以去一下DNA再往后面做

不会吧？ambion或Roche的试剂有这么差吗？虽然没用过这两家国际知名公司的Trizol，但我觉得不至于提出那么多的DNA。除非楼主非常违规操作。
建议楼主咨询该公司技术支持。
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伟大航线....
5楼2012-06-02 10:26:57
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huangzhenjie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-06-01 16:35:36
你买的酶会有使用说明，不同公司的酶应该不一样吧，我们用的宝公司的酶，后面也是用的EDTA终止反应，对后面的反转录没有影响。...

嗯，谢谢，我用fermentas 的，EDTA终止反应后，我没回收，拿去反转了，也行。
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6楼2012-06-07 11:58:05
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huangzhenjie

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by longrna at 2012-06-02 10:26:57
不会吧？ambion或Roche的试剂有这么差吗？虽然没用过这两家国际知名公司的Trizol，但我觉得不至于提出那么多的DNA。除非楼主非常违规操作。
建议楼主咨询该公司技术支持。...

嗯，谢谢，不知道是不是 抽提完取上清时（取了400ul,）导致的DNA污染。我会再提看看。
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7楼2012-06-07 12:03:30
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longrna

新虫 (正式写手)
其实，究竟是不是DNA仍有待证明吧
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伟大航线....
8楼2012-06-07 18:12:48
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xpb2005

银虫 (小有名气)
（急）
想请教楼主，酵母的RNA提取你用液氮研磨法，是在研钵中研磨吗？还是在其他容器中研磨，您怎么做的，恳请您说的具体点，另外，你收集多少ml菌体来做呢？我也想提取酵母的RNA,提了2次都没有成功，用的是sigma的triozl,我是直接收集菌体后加triozl做的，会不会是酵母细胞壁没破除导致实验不成功，恳请楼主分享经验。谢谢您，祝您试验顺利。
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9楼2012-07-23 21:48:17
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nxf121431

新虫 (初入文坛)
我想问一下 我现在用浓盐法提取酵母的rna 摇瓶培养要养多久啊
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10楼2016-03-22 18:22:37
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