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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母 基因组提取问题
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lilylove170

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母 基因组提取问题 已有8人参与

原则上要求用 玻璃珠进行细胞壁破碎，但是手头没有小颗粒的玻璃珠可以使用，能不能用石英砂来代替啊，有没有人用石英砂来破过酵母细胞壁啊，谢谢回复
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1楼 2011-08-29 16:12:48
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
石英砂也可以的，最好是先混匀了冻一下
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2楼2011-08-29 17:12:31
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xulanzzz

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可以的，看到提取RNA时可以用玻璃珠或者是石英砂破真菌或者是阳性细菌。。
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DOBEST
3楼2011-08-29 20:29:00
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
完全可以的，买点粗粒石英砂，可以先用酸处理下最好。细粒的不能用涡旋振荡了，只能用研钵。
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4楼2011-08-30 09:41:29
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chenllky2011

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可以代替用的，并且效果更好
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闪亮登场
5楼2011-08-30 11:03:26
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我用研钵将石英砂研成很小的粉，漩涡可以达到很好的破胞效果。protocol如下：
1.        取1 ml过夜培养的酵母培养液于1.5 ml EP管中，3000 rpm离心1 min，收集菌体；
2.        加入500 ul无菌水洗涤菌体，12000 rpm离心1 min，弃上清；
3.        加入200 ul石英砂悬液（10％ w/v，研磨后的石英砂重悬于PH 8.0 TE溶液）悬浮细胞，200 ul酚/氯仿/异戊醇（v/v  25：24：1），高速漩涡振荡5 min；
4.        12000rpm离心5 min，将水相转移至干净EP管中；
5.        加入1/10体积的5M的NaAc（40 ul），3倍体积的冰无水乙醇（400－500 ul），－20℃沉降1 h；
6.        4 ℃ 12000 rpm离心10min，弃上清；
7.        加入500 ul 70％乙醇洗涤，12000 rpm离心5 min弃上清；
8.        重复洗涤一次；
9.        小心吸干残留液体，37 ℃培养箱干燥5-10 min；
10.        加入25ul双蒸水溶解DNA，加1ul RNase处理30 min,取1 uL电泳检测。
基因组提出来一般般，但做模板问题不大。



[ Last edited by susizheng on 2011-8-30 at 17:08 ]
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Thank-you，so-blue.
6楼2011-08-30 17:00:01
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瓶儿花

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可以的，预先冷冻一下，效果很好的。
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7楼2011-08-31 14:21:14
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learningying

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
完全可以的，不过石英砂的直接最好在400 mm到600mm之间吧，我不知道你的怎么样。。。
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加油，天道酬勤
8楼2014-11-06 16:14:04
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LHByes

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by susizheng at 2011-08-30 17:00:01
我用研钵将石英砂研成很小的粉，漩涡可以达到很好的破胞效果。protocol如下：
1.        取1 ml过夜培养的酵母培养液于1.5 ml EP管中，3000 rpm离心1 min，收集菌体；
2.        加入500 ul无菌水洗涤菌体，12000 rpm离心1 min， ...

请问 酵母破壁你的方法 ‘加 1/10 体积 5M NaAc’ PH 是多少呀 谢谢你 我是新手
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加油！
9楼2015-04-21 17:39:38
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