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lilylove170

新虫 (小有名气)

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专业: 土壤学

[交流] 酵母基因组提取问题已有8人参与

原则上要求用玻璃珠进行细胞壁破碎，但是手头没有小颗粒的玻璃珠可以使用，能不能用石英砂来代替啊，有没有人用石英砂来破过酵母细胞壁啊，谢谢回复

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1楼 2011-08-29 16:12:48

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

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帖子: 2319
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注册: 2008-11-01
性别: GG
专业: 有机合成

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

我用研钵将石英砂研成很小的粉，漩涡可以达到很好的破胞效果。protocol如下：
1. 取1 ml过夜培养的酵母培养液于1.5 ml EP管中，3000 rpm离心1 min，收集菌体；
2. 加入500 ul无菌水洗涤菌体，12000 rpm离心1 min，弃上清；
3. 加入200 ul石英砂悬液（10％ w/v，研磨后的石英砂重悬于PH 8.0 TE溶液）悬浮细胞，200 ul酚/氯仿/异戊醇（v/v 25：24：1），高速漩涡振荡5 min；
4. 12000rpm离心5 min，将水相转移至干净EP管中；
5. 加入1/10体积的5M的NaAc（40 ul），3倍体积的冰无水乙醇（400－500 ul），－20℃沉降1 h；
6. 4 ℃ 12000 rpm离心10min，弃上清；
7. 加入500 ul 70％乙醇洗涤，12000 rpm离心5 min弃上清；
8. 重复洗涤一次；
9. 小心吸干残留液体，37 ℃培养箱干燥5-10 min；
10. 加入25ul双蒸水溶解DNA，加1ul RNase处理30 min,取1 uL电泳检测。
基因组提出来一般般，但做模板问题不大。

[ Last edited by susizheng on 2011-8-30 at 17:08 ]