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huangzhenjie

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母RNA提取问题

最近连续几次提了酿酒酵母的RNA(用液氮研磨, ambion 和roche的TRIzol 提),为什么电泳跑出来有四、五条条带(见下图)。到底哪三条才是RNA?其他的条带都是DNA污染吗?这样的能用来做反转录和QPCR吗?急需帮助,谢谢各位!

rna
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-05-29 08:37:01
上面两条是DNA污染,这样的话不建议进行下一步实验,你可以去一下DNA再往后面做

不会吧?ambion或Roche的试剂有这么差吗?虽然没用过这两家国际知名公司的Trizol,但我觉得不至于提出那么多的DNA。除非楼主非常违规操作。
建议楼主咨询该公司技术支持。
伟大航线....
5楼2012-06-02 10:26:57
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-05-29 18:51:40
上面两条是DNA污染,这样的话不建议进行下一步实验,你可以去一下DNA再往后面做
上班族,学习ing……
2楼2012-05-29 08:37:01
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huangzhenjie

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dhmdddd at 2012-05-29 08:37:01
上面两条是DNA污染,这样的话不建议进行下一步实验,你可以去一下DNA再往后面做

嗯,那请问加DNase I (RNase free)去DNA的具体步骤是怎样的,好像最后要加EDTA终止反应,那EDTA对后面的反转录酶没影响吗?谢谢!
3楼2012-05-29 15:40:19
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by huangzhenjie at 2012-05-29 15:40:19
嗯,那请问加DNase I (RNase free)去DNA的具体步骤是怎样的,好像最后要加EDTA终止反应,那EDTA对后面的反转录酶没影响吗?谢谢!...

你买的酶会有使用说明,不同公司的酶应该不一样吧,我们用的宝公司的酶,后面也是用的EDTA终止反应,对后面的反转录没有影响。
上班族,学习ing……
4楼2012-06-01 16:35:36
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