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shelly9018

新虫 (小有名气)

[交流] 提取环境微生物的RNA,做微生物群落结构分析,请问要注意哪些问题啊? 已有5人参与

提取环境微生物的RNA,做微生物群落结构分析,请问要注意哪些问题啊?从样品保存,前处理,到提取,希望各位虫友帮帮忙,说得越详细越好!新手,希望能准备的全面点
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renzhiq

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2013-05-01 22:11:20
首先是取样,取样有要快速的件样品保存,一般采用液氮速冻。所取样品如不能及时提取,至少应将样品保存于-80摄氏度冰箱。
前处理的话主要是杂质的去除,让你的样品中如固体悬浮颗粒降低,尽量增减样品中菌丝体的浓度
提取时需要做到菌体破壁完全,操作迅速,全程无RNA酶污染降解,最后用DNA酶充分消化后,尽快反转录,如果不能尽快反转录,保存于-80摄氏度冰箱
祝实验顺利
如有其它不明白,可以直接联系我373775310
2楼2013-04-30 23:44:11
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gaolijuan913

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
先自己查资料啊  你这就全部都指望别人不好吧?自己没老师么?
nothing
3楼2013-05-01 08:46:23
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shelly9018

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gaolijuan913 at 2013-05-01 08:46:23
先自己查资料啊  你这就全部都指望别人不好吧?自己没老师么?

这个方面实验室没人做过,文献资料不可能把经验细节都告诉你!
4楼2013-05-01 10:32:17
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shelly9018

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhiq at 2013-04-30 23:44:11
首先是取样,取样有要快速的件样品保存,一般采用液氮速冻。所取样品如不能及时提取,至少应将样品保存于-80摄氏度冰箱。
前处理的话主要是杂质的去除,让你的样品中如固体悬浮颗粒降低,尽量增减样品中菌丝体的浓 ...

要比较好的实验参考资料推荐下不!
5楼2013-05-01 10:34:37
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见神一笑

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做微生物群落结构分析要提RNA?你用哪个基因的RNA来分析啊?
好好努力
6楼2013-05-02 08:21:57
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shelly9018

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 见神一笑 at 2013-05-02 08:21:57
做微生物群落结构分析要提RNA?你用哪个基因的RNA来分析啊?

16sRNA,一般是用DNA的,但是我要做活性群落分析
7楼2013-05-02 08:47:51
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eagles123

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
sigma 有一种RNase Zap 买一瓶 到处喷喷 效果很好哟  还有你是用kit提 还是还是啥? 用kit简单得多
8楼2013-05-02 09:40:49
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tjhyf2012

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhiq at 2013-04-30 23:44:11
首先是取样,取样有要快速的件样品保存,一般采用液氮速冻。所取样品如不能及时提取,至少应将样品保存于-80摄氏度冰箱。
前处理的话主要是杂质的去除,让你的样品中如固体悬浮颗粒降低,尽量增减样品中菌丝体的浓 ...

请教一下,我目前在提取生物浸矿里面的RNA,每次得到的样品浓度都非常低,大概40ng/ul左右,电泳都看不到条带,按照您的说法,是否因为矿石颗粒存在于体系中,会造成RNA的大量损失?谢谢!
9楼2014-01-03 21:41:52
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