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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌 平菇 RNA如何提取，为什么凝胶检测有四条带
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yinchaomin

新虫 (小有名气)

[求助] 真菌 平菇 RNA如何提取，为什么凝胶检测有四条带

最近小弟在提平菇菌丝RNA，不知道什么原因，提出的RNA经凝胶检测有四条带，且带不是很亮，已经好几次是这样的状况了，急得很。请各位大侠帮帮忙，看看是怎么回事，用的是takara的tri-zol 经液氮研磨提取的，谢谢！
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1楼 2012-02-23 20:50:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoj9663

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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yinchaomin(金币+1): ★有帮助 2012-02-25 21:05:14
看图的话拖带很严重，胶孔还有杂质残留，说明RNA提的不纯，蛋白质多糖残留过多。

另外我怀疑你的电泳上样量有点大，建议用这次1/5和1/10的RNA量再跑次电泳试试
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yinchaomin
4楼2012-02-25 11:26:22
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普通回帖

tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
貌似有多糖什么的，你可以在沉淀那一步加点盐试试，具体搜索protocol
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阳光总在风雨后
2楼2012-02-24 11:41:26
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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yinchaomin(金币+1): ★有帮助 2012-02-25 21:06:53
hi ,你能不能将你的RNA纯化一下，然后走一个比较好的胶，看看是不是还是四条带？  还有，有没有其它的报道说你这个材料分离出来的total RNA是这样的四条带的？
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致良知
3楼2012-02-24 23:37:22
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提取的RNA应该不纯，那四条带中应该有混合物的条带，如果要得到漂亮的条带，最好纯化一下
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5楼2012-02-25 14:02:10
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yinchaomin

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by tanche163 at 2012-02-24 11:41:26:
貌似有多糖什么的，你可以在沉淀那一步加点盐试试，具体搜索protocol

提取过程中已经加入了0.8M柠檬酸钠盐+1.2M Nacl 的盐溶液沉淀过了，最后还是这样，都提了一个多月了，真郁闷！还是要谢谢你，呵呵~~
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6楼2012-02-25 20:51:37
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yinchaomin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-02-24 23:37:22:
hi ,你能不能将你的RNA纯化一下，然后走一个比较好的胶，看看是不是还是四条带？  还有，有没有其它的报道说你这个材料分离出来的total RNA是这样的四条带的？

提了好几次，都是这样，以前有师兄提过，都是明显的3条带，我都提了一个多月了，一直是这样，参考文献里也没有出现4条带的现象。谢谢~~
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7楼2012-02-25 20:53:14
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yinchaomin

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
楼: Originally posted by xiaoj9663 at 2012-02-25 11:26:22:
看图的话拖带很严重，胶孔还有杂质残留，说明RNA提的不纯，蛋白质多糖残留过多。

另外我怀疑你的电泳上样量有点大，建议用这次1/5和1/10的RNA量再跑次电泳试试

到底为什么会托带啊，仁兄，能讲明白点不？我用的枪头啥的都是公司里面买的，应该没什么问题呀！！
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8楼2012-02-25 21:02:31
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yinchaomin

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by lillian菲 at 2012-02-25 14:02:10:
你提取的RNA应该不纯，那四条带中应该有混合物的条带，如果要得到漂亮的条带，最好纯化一下

应该不纯，就是不知道问题出在哪里，真郁闷，但还是要谢谢你，呵呵~~
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9楼2012-02-25 21:03:51
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xiaoj9663

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yinchaomin at 2012-02-25 21:02:31:
到底为什么会托带啊，仁兄，能讲明白点不？我用的枪头啥的都是公司里面买的，应该没什么问题呀！！

拖带一般是有杂质造成的，杂质在跑电泳过程中残留在胶里形成拖带。另外RNA降解也有可能造成的弥散性条带。
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yinchaomin
10楼2012-02-26 00:05:49
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