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yinchaomin

新虫 (小有名气)

[求助] 真菌 平菇 RNA如何提取,为什么凝胶检测有四条带

最近小弟在提平菇菌丝RNA,不知道什么原因,提出的RNA经凝胶检测有四条带,且带不是很亮,已经好几次是这样的状况了,急得很。请各位大侠帮帮忙,看看是怎么回事,用的是takara的tri-zol 经液氮研磨提取的,谢谢!
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xiaoj9663

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
yinchaomin(金币+1): ★有帮助 2012-02-25 21:05:14
看图的话拖带很严重,胶孔还有杂质残留,说明RNA提的不纯,蛋白质多糖残留过多。

另外我怀疑你的电泳上样量有点大,建议用这次1/5和1/10的RNA量再跑次电泳试试

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4楼2012-02-25 11:26:22
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普通回帖

tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
貌似有多糖什么的,你可以在沉淀那一步加点盐试试,具体搜索protocol
阳光总在风雨后
2楼2012-02-24 11:41:26
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
yinchaomin(金币+1): ★有帮助 2012-02-25 21:06:53
hi ,你能不能将你的RNA纯化一下,然后走一个比较好的胶,看看是不是还是四条带?  还有,有没有其它的报道说你这个材料分离出来的total RNA是这样的四条带的?
致良知
3楼2012-02-24 23:37:22
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lillian菲

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你提取的RNA应该不纯,那四条带中应该有混合物的条带,如果要得到漂亮的条带,最好纯化一下
5楼2012-02-25 14:02:10
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yinchaomin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by tanche163 at 2012-02-24 11:41:26:
貌似有多糖什么的,你可以在沉淀那一步加点盐试试,具体搜索protocol

提取过程中已经加入了0.8M柠檬酸钠盐+1.2M Nacl 的盐溶液沉淀过了,最后还是这样,都提了一个多月了,真郁闷!还是要谢谢你,呵呵~~
6楼2012-02-25 20:51:37
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yinchaomin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-02-24 23:37:22:
hi ,你能不能将你的RNA纯化一下,然后走一个比较好的胶,看看是不是还是四条带?  还有,有没有其它的报道说你这个材料分离出来的total RNA是这样的四条带的?

提了好几次,都是这样,以前有师兄提过,都是明显的3条带,我都提了一个多月了,一直是这样,参考文献里也没有出现4条带的现象。谢谢~~
7楼2012-02-25 20:53:14
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yinchaomin

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by xiaoj9663 at 2012-02-25 11:26:22:
看图的话拖带很严重,胶孔还有杂质残留,说明RNA提的不纯,蛋白质多糖残留过多。

另外我怀疑你的电泳上样量有点大,建议用这次1/5和1/10的RNA量再跑次电泳试试

到底为什么会托带啊,仁兄,能讲明白点不?我用的枪头啥的都是公司里面买的,应该没什么问题呀!!
8楼2012-02-25 21:02:31
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yinchaomin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
楼: Originally posted by lillian菲 at 2012-02-25 14:02:10:
你提取的RNA应该不纯,那四条带中应该有混合物的条带,如果要得到漂亮的条带,最好纯化一下

应该不纯,就是不知道问题出在哪里,真郁闷,但还是要谢谢你,呵呵~~
9楼2012-02-25 21:03:51
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xiaoj9663

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yinchaomin at 2012-02-25 21:02:31:
到底为什么会托带啊,仁兄,能讲明白点不?我用的枪头啥的都是公司里面买的,应该没什么问题呀!!

拖带一般是有杂质造成的,杂质在跑电泳过程中残留在胶里形成拖带。另外RNA降解也有可能造成的弥散性条带。

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10楼2012-02-26 00:05:49
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