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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 提取环境微生物的RNA，做微生物群落结构分析，请问要注意哪些问题啊？
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shelly9018

新虫 (小有名气)

[交流] 提取环境微生物的RNA，做微生物群落结构分析，请问要注意哪些问题啊？ 已有5人参与

提取环境微生物的RNA，做微生物群落结构分析，请问要注意哪些问题啊？从样品保存，前处理，到提取，希望各位虫友帮帮忙，说得越详细越好！新手，希望能准备的全面点
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1楼 2013-04-30 16:53:50
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renzhiq

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-05-01 22:11:20
首先是取样，取样有要快速的件样品保存，一般采用液氮速冻。所取样品如不能及时提取，至少应将样品保存于-80摄氏度冰箱。
前处理的话主要是杂质的去除，让你的样品中如固体悬浮颗粒降低，尽量增减样品中菌丝体的浓度
提取时需要做到菌体破壁完全，操作迅速，全程无RNA酶污染降解，最后用DNA酶充分消化后，尽快反转录，如果不能尽快反转录，保存于-80摄氏度冰箱
祝实验顺利
如有其它不明白，可以直接联系我373775310
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2楼2013-04-30 23:44:11
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gaolijuan913

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先自己查资料啊  你这就全部都指望别人不好吧？自己没老师么？
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nothing
3楼2013-05-01 08:46:23
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shelly9018

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaolijuan913 at 2013-05-01 08:46:23
先自己查资料啊  你这就全部都指望别人不好吧？自己没老师么？

这个方面实验室没人做过，文献资料不可能把经验细节都告诉你！
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4楼2013-05-01 10:32:17
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shelly9018

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhiq at 2013-04-30 23:44:11
首先是取样，取样有要快速的件样品保存，一般采用液氮速冻。所取样品如不能及时提取，至少应将样品保存于-80摄氏度冰箱。
前处理的话主要是杂质的去除，让你的样品中如固体悬浮颗粒降低，尽量增减样品中菌丝体的浓 ...

要比较好的实验参考资料推荐下不！
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5楼2013-05-01 10:34:37
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见神一笑

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做微生物群落结构分析要提RNA？你用哪个基因的RNA来分析啊？
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好好努力
6楼2013-05-02 08:21:57
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shelly9018

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 见神一笑 at 2013-05-02 08:21:57
做微生物群落结构分析要提RNA？你用哪个基因的RNA来分析啊？

16sRNA，一般是用DNA的，但是我要做活性群落分析
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7楼2013-05-02 08:47:51
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eagles123

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sigma 有一种RNase Zap 买一瓶 到处喷喷 效果很好哟  还有你是用kit提 还是还是啥？ 用kit简单得多
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8楼2013-05-02 09:40:49
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tjhyf2012

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by renzhiq at 2013-04-30 23:44:11
首先是取样，取样有要快速的件样品保存，一般采用液氮速冻。所取样品如不能及时提取，至少应将样品保存于-80摄氏度冰箱。
前处理的话主要是杂质的去除，让你的样品中如固体悬浮颗粒降低，尽量增减样品中菌丝体的浓 ...

请教一下，我目前在提取生物浸矿里面的RNA，每次得到的样品浓度都非常低，大概40ng/ul左右，电泳都看不到条带，按照您的说法，是否因为矿石颗粒存在于体系中，会造成RNA的大量损失？谢谢！
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9楼2014-01-03 21:41:52
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