应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌RNA的提取
81/1返回列表
查看: 2169  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

陈浩南-1987

铁虫 (正式写手)

[求助] 细菌RNA的提取

本人想用RT-PCR做细菌的基因表达，请问有没有做过细菌RNA提取的？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-26 15:57:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yemuren

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-09-26 17:48:06
首先你要注意要在细菌有转录你的目的基因最高峰的时候收集菌体，迅速冷冻，这样获得的RNA中你目的基因的丰度更高；至于RNA的提取，参照真菌的RNA提取方法就可以了一般用Trizol试剂提取，也有用试剂盒提取的，主要还是要注意所有用具都要去除RNase，使用新的有机溶剂异丙醇氯仿等，提取过程迅速就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
我的专长叫做流浪，所以我就做了流氓~
2楼2011-09-26 16:16:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhymhbu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yemuren at 2011-09-26 16:16:26:
首先你要注意要在细菌有转录你的目的基因最高峰的时候收集菌体，迅速冷冻，这样获得的RNA中你目的基因的丰度更高；至于RNA的提取，参照真菌的RNA提取方法就可以了一般用Trizol试剂提取，也有用试剂盒提取的，主要 ...

冷冻是指冰箱-20度，还是指液氮冷冻。保存多长时间可以

此外，楼主是做半定量PCR吗
赞一下 回复此楼
微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
3楼2011-09-26 17:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yemuren

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-09-27 10:38:27
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhymhbu at 2011-09-26 17:07:20:
冷冻是指冰箱-20度，还是指液氮冷冻。保存多长时间可以

此外，楼主是做半定量PCR吗

液氮冷冻，最好是直接液氮研磨，如果没准备好其他的东西的话，先也氮冷冻，然后放到-80冰箱里。保存时间多久没试过，我一般都是直接提，最多的时候放了两天。
赞一下(1人) 回复此楼
我的专长叫做流浪，所以我就做了流氓~
4楼2011-09-26 19:41:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈浩南-1987

铁虫 (正式写手)
大家没有把握住要点，细菌是原核，跟真核的不一样，转录不一样，而且没有polyA尾巴，我就想问问这点如何解决
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-27 21:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雅yakee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

怎么知道什么时候是我目的基因最高峰的时候呢？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-09-25 15:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1929148楼: Originally posted by 陈浩南-1987 at 2011-09-27 21:40:16
大家没有把握住要点，细菌是原核，跟真核的不一样，转录不一样，而且没有polyA尾巴，我就想问问这点如何解决

这点很好解决啊，RT的时候用基因特异引物或者随机引物就行了么。又不是非得用oligo(dT)
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-25 22:27:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1929148楼: Originally posted by 陈浩南-1987 at 2011-09-27 21:40:16
大家没有把握住要点，细菌是原核，跟真核的不一样，转录不一样，而且没有polyA尾巴，我就想问问这点如何解决

先提总RNA，反转录时不用oligo dT引物，可以用随机引物或者基因特异引物。如果你的目的基因的丰度不是很低的话，用随机引物比较好，这样合成的cDNA可以想做什么基因就做，方便比较。
赞一下 回复此楼
8楼2012-09-26 10:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 陈浩南-1987 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭