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银虫 (正式写手)

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[求助] 请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题

我实验室的Trizol提取RNA，氯仿分层以后，提取上清液，加入异丙醇时，出现大量浑浊悬浮白色沉淀，而且离心后发现管底有一大坨白色物质，量很大，应该不是RNA那种透明的胶状沉淀。这个沉淀很难溶解，我加了500微升的水才完全溶解。
我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！

另外，我又买promega试剂盒Z3100，提取RNA，效果也不是很好，我的下游主要是做PCR。
我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！

电泳图见附件，第2，3泳道是用Trizol提的，4，5泳道是用试剂盒提的！
如果做PCR的话，后两个泳道的RNA可以用吗？可以直接进行一步法PCR吗？

谢谢！

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1楼 2012-07-16 19:31:38

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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励热心的虫虫，积极交流经验 2012-07-18 13:53:40

12泳道也不是完全降解，降解的话应该弥散的带，你这个还能看到2条主带，3 4泳道，我认为完全可以做反转录，做PCR。
下面是我用trizol提植物RNA的一些建议：
用trizol提的时候，加入trizol后充分裂解，离心裂解破碎的细胞杂质，吸上清后，再加氯仿抽取，再加异丙醇沉淀。如果认为杂质还是很多，可以重复用氯仿抽取数次，然后再沉淀。最后一次氯仿抽提，吸上清切记不用洗到中间层。沉淀RNA，离心后，若不见胶状沉淀，也不要认为RNA没有，用30微升DEPC水反复吹打并冲洗管壁。
是提植物RNA吗？研磨的样品可以多点，1.5ml管我一般是装到0.3-0.5ml 加1ml trizol 我做的是大豆根茎叶种子用trizol 都有不错的结果。根茎 trizol 最好提了。物种不同方法也不同用的RNA试剂也不同，棉花高酚的用trizol 就不行。自己再多试试吧。