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请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题
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我实验室的Trizol提取RNA，氯仿分层以后，提取上清液，加入异丙醇时，出现大量浑浊悬浮白色沉淀，而且离心后发现管底有一大坨白色物质，量很大，应该不是RNA那种透明的胶状沉淀。这个沉淀很难溶解，我加了500微升的水才完全溶解。 我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！ 另外，我又买promega试剂盒Z3100，提取RNA，效果也不是很好，我的下游主要是做PCR。 我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！ 电泳图见附件，第2，3泳道是用Trizol提的，4，5泳道是用试剂盒提的！ 如果做PCR的话，后两个泳道的RNA可以用吗？可以直接进行一步法PCR吗？ 谢谢！  |
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 【分子生物】EPI帖 |
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小虫子666
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励热心的虫虫，积极交流经验 2012-07-18 13:53:40
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励热心的虫虫，积极交流经验 2012-07-18 13:53:40
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12泳道也不是完全降解，降解的话应该弥散的带，你这个还能看到2条主带，3 4泳道，我认为完全可以做反转录，做PCR。 下面是我用trizol提植物RNA的一些建议： 用trizol提的时候，加入trizol后充分裂解，离心裂解破碎的细胞杂质， 吸上清后，再加氯仿抽取，再加异丙醇沉淀。如果认为杂质还是很多，可以重复用氯仿抽取数次，然后再沉淀。最后一次氯仿抽提，吸上清切记不用洗到中间层。沉淀RNA，离心后，若不见胶状沉淀，也不要认为RNA没有，用30微升DEPC水反复吹打并冲洗管壁。 是提植物RNA吗？ 研磨的样品可以多点，1.5ml管我一般是装到0.3-0.5ml 加1ml trizol 我做的是大豆 根茎叶 种子用trizol 都有不错的结果 。 根 茎 trizol 最好提了。 物种不同方法也不同用的RNA试剂也不同，棉花高酚的用trizol 就不行。自己再多试试吧。 |
7楼2012-07-17 11:02:59
shenye.judy
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nmhsd
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