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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题
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18988582

银虫 (正式写手)

[求助] 请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题

我实验室的Trizol提取RNA，氯仿分层以后，提取上清液，加入异丙醇时，出现大量浑浊悬浮白色沉淀，而且离心后发现管底有一大坨白色物质，量很大，应该不是RNA那种透明的胶状沉淀。这个沉淀很难溶解，我加了500微升的水才完全溶解。
    我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！


另外，我又买promega试剂盒Z3100，提取RNA，效果也不是很好，我的下游主要是做PCR。
我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！


电泳图见附件，第2，3泳道是用Trizol提的，4，5泳道是用试剂盒提的！
如果做PCR的话，后两个泳道的RNA可以用吗？可以直接进行一步法PCR吗？

谢谢！
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1楼 2012-07-16 19:31:38
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18988582

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-07-17 11:07:08
后面两个应该可以做，一般我们做只需要前面两条带。你用trizol提取时，建议加氯仿后，宁可少去上清液也不要污染，1000微升的trizol月600就够了

我已经很小心的吸取上清了

为啥后面两个也只有一条带呢
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坚持我的！
9楼2012-07-17 11:11:04
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励新虫发帖交流，欢迎常来生物医药区 2012-07-16 20:17:20
1.2两个是降解了，小分子量的地方很亮
3,4你可以试试，至少没怎么降解。
你说原来提的好，是一样的材料吗？不同的材料需要用不同的提取方法。
我以前提植物根，用trizol，结果最后出来很多难溶的白色沉淀，我用低速离心把白色弄成沉淀，吸取上清跑RNA也是能跑出来可以用的条带，一般来说是蛋白污染。
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2楼2012-07-16 19:39:51
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yuzengyang

新虫 (初入文坛)
跟老板说说买PCR仪吧
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3楼2012-07-16 19:56:31
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18988582

银虫 (正式写手)
我用的是动物的性腺组织
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坚持我的！
4楼2012-07-16 20:03:57
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