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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题
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xw19880905

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-07-17 11:07:08
后面两个应该可以做，一般我们做只需要前面两条带。你用trizol提取时，建议加氯仿后，宁可少去上清液也不要污染，1000微升的trizol月600就够了

后面那个也是两天带呀，我原来也是用trizol提的，效果不好，后面采用的试剂盒，效果不错
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11楼2012-07-18 11:46:35
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Icityman

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我想请问一下我这里加的Trizol是碱酚，而不是酸酚，这样有关系吗
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12楼2012-07-18 18:34:33
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328533973

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应 2012-07-19 15:11:49
第2,3泳道的RNA降解得比较严重，是否是使用器材未RNA酶抑制剂处理好？第4泳道RNA的量比较多，如果为目的片段，可用于后续的PCR，第5泳道的回收后注意用量也可以做后续的PCR。当提取RNA比较纯是一般可以用一步法。关于“提取上清液，加入异丙醇时，出现大量浑浊悬浮白色沉淀，而且离心后发现管底有一大坨白色物质，量很大，应该不是RNA那种透明的胶状沉淀。这个沉淀很难溶解，我加了500微升的水才完全溶解。”的问题，本人认为可能是加入异丙醇后晃动较为剧烈的原因，仅供参考。
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一点一滴成积累
13楼2012-07-18 19:37:20
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千里鼠0609

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-18 00:04:35
提RNA一般注意一点，就是吸取上清时，宁缺毋滥，尽量少去一些，决不能吸到中间层。一般Trizol就能胜任，植物中，我提过兰花的，草莓的，枣树的等，动物细胞sf-9的，及其他一些昆虫，都能做出下游普通的RT-PCR实验

这位GG，我最近在做松树树干部位的提取，目前在试Trizol，可是没提出来，只出来不溶于酒精和水的沉淀，OD值也一塌糊涂，有资料说加PVP，有木有这个必要啊，有神马意见或者建议啊
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14楼2012-07-19 11:00:11
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nmhsd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 千里鼠0609 at 2012-07-19 11:00:11
这位GG，我最近在做松树树干部位的提取，目前在试Trizol，可是没提出来，只出来不溶于酒精和水的沉淀，OD值也一塌糊涂，有资料说加PVP，有木有这个必要啊，有神马意见或者建议啊...

松树树干？多粗的树，树干中的细胞可都是死细胞啊，不要说提RNA，就是提取DNA也很困难啊，树干中只有一些射线细胞是活细胞。如果你真要这么做，还是从材料入手吧。不知道你最终要解决什么问题，能取幼嫩的松树木质部吗？
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15楼2012-07-19 21:52:36
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千里鼠0609

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-19 21:52:36
松树树干？多粗的树，树干中的细胞可都是死细胞啊，不要说提RNA，就是提取DNA也很困难啊，树干中只有一些射线细胞是活细胞。如果你真要这么做，还是从材料入手吧。不知道你最终要解决什么问题，能取幼嫩的松树木质 ...

我想用一到两年生的松树幼苗······然后取它的枝条~可能是因为因为细胞里的多糖和多酚比较多，萜类也比较多，所以提取很糟糕·········研磨也不知道该怎么折腾
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16楼2012-07-20 08:58:34
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sxxyxh

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-24 13:41:41
我昨天提RNA也遇到这个问题，并且我们实验室之前也有人遇到这个问题。

目前我的推测是：匀浆时组织加多了。原因：
1.我之前提的脾脏和头肾组织RNA，效果非常好；偏偏提肝脏出这样的问题，我们实验室人出这问题也是在肝脏组织。后来我发现，TaKaRa的RNAiso Plus提RNA，每g脑组织可提取1500μg RNA，每g烟草叶片可提取1000μg RNA，而每g肝脏组织可提高达5000μg的RNA。
2.测浓度时，OD280值并不大，且跑胶时胶孔未见蛋白残留，说明那一大坨白色物质不太可能是蛋白。

另一个可能的原因是：乙醇未除干净，因为OD230较大，而盐离子浓度影响RNA的溶解度。

另外我想问问楼主，加Trizol后匀浆离心后，上层是否漂有白白的颗粒状东西？
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17楼2012-10-25 22:41:03
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12101008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我最近也提RNA，我是来蹭经验的
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18楼2012-11-23 23:32:37
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by sxxyxh at 2012-10-25 22:41:03
我昨天提RNA也遇到这个问题，并且我们实验室之前也有人遇到这个问题。

目前我的推测是：匀浆时组织加多了。原因：
1.我之前提的脾脏和头肾组织RNA，效果非常好；偏偏提肝脏出这样的问题，我们实验室人出这问题也 ...

请问你们一般用多少的转速匀浆的？我感觉RNA得率和完整性好像和转速也有关，转速太低不能完全裂解，而转速太高好像也不好，提出的RNA有都降解了。
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19楼2013-06-19 09:24:14
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大洛阳爷爷

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 18988582 at 2012-07-17 11:11:04
我已经很小心的吸取上清了

为啥后面两个也只有一条带呢...

请问你有Z3100的中文说明书么？
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20楼2016-09-05 15:19:58
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