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18988582

银虫 (正式写手)

[求助] 请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题

我实验室的Trizol提取RNA,氯仿分层以后,提取上清液,加入异丙醇时,出现大量浑浊悬浮白色沉淀,而且离心后发现管底有一大坨白色物质,量很大,应该不是RNA那种透明的胶状沉淀。这个沉淀很难溶解,我加了500微升的水才完全溶解。
    我以前提的效果很好,不知道这几次到底是什么原因?请帮忙分析一下!


另外,我又买promega试剂盒Z3100,提取RNA,效果也不是很好,我的下游主要是做PCR。
我以前提的效果很好,不知道这几次到底是什么原因?请帮忙分析一下!


电泳图见附件,第2,3泳道是用Trizol提的,4,5泳道是用试剂盒提的!
如果做PCR的话,后两个泳道的RNA可以用吗?可以直接进行一步法PCR吗?

谢谢!
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千里鼠0609

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-18 00:04:35
提RNA一般注意一点,就是吸取上清时,宁缺毋滥,尽量少去一些,决不能吸到中间层。一般Trizol就能胜任,植物中,我提过兰花的,草莓的,枣树的等,动物细胞sf-9的,及其他一些昆虫,都能做出下游普通的RT-PCR实验

这位GG,我最近在做松树树干部位的提取,目前在试Trizol,可是没提出来,只出来不溶于酒精和水的沉淀,OD值也一塌糊涂,有资料说加PVP,有木有这个必要啊,有神马意见或者建议啊
14楼2012-07-19 11:00:11
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千里鼠0609

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-19 21:52:36
松树树干?多粗的树,树干中的细胞可都是死细胞啊,不要说提RNA,就是提取DNA也很困难啊,树干中只有一些射线细胞是活细胞。如果你真要这么做,还是从材料入手吧。不知道你最终要解决什么问题,能取幼嫩的松树木质 ...

我想用一到两年生的松树幼苗······然后取它的枝条~可能是因为因为细胞里的多糖和多酚比较多,萜类也比较多,所以提取很糟糕·········研磨也不知道该怎么折腾
16楼2012-07-20 08:58:34
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