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18988582

银虫 (正式写手)

[求助] 请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题

我实验室的Trizol提取RNA,氯仿分层以后,提取上清液,加入异丙醇时,出现大量浑浊悬浮白色沉淀,而且离心后发现管底有一大坨白色物质,量很大,应该不是RNA那种透明的胶状沉淀。这个沉淀很难溶解,我加了500微升的水才完全溶解。
    我以前提的效果很好,不知道这几次到底是什么原因?请帮忙分析一下!


另外,我又买promega试剂盒Z3100,提取RNA,效果也不是很好,我的下游主要是做PCR。
我以前提的效果很好,不知道这几次到底是什么原因?请帮忙分析一下!


电泳图见附件,第2,3泳道是用Trizol提的,4,5泳道是用试剂盒提的!
如果做PCR的话,后两个泳道的RNA可以用吗?可以直接进行一步法PCR吗?

谢谢!
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千里鼠0609

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-18 00:04:35
提RNA一般注意一点,就是吸取上清时,宁缺毋滥,尽量少去一些,决不能吸到中间层。一般Trizol就能胜任,植物中,我提过兰花的,草莓的,枣树的等,动物细胞sf-9的,及其他一些昆虫,都能做出下游普通的RT-PCR实验

这位GG,我最近在做松树树干部位的提取,目前在试Trizol,可是没提出来,只出来不溶于酒精和水的沉淀,OD值也一塌糊涂,有资料说加PVP,有木有这个必要啊,有神马意见或者建议啊
14楼2012-07-19 11:00:11
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励新虫发帖交流,欢迎常来生物医药区 2012-07-16 20:17:20
1.2两个是降解了,小分子量的地方很亮
3,4你可以试试,至少没怎么降解。
你说原来提的好,是一样的材料吗?不同的材料需要用不同的提取方法。
我以前提植物根,用trizol,结果最后出来很多难溶的白色沉淀,我用低速离心把白色弄成沉淀,吸取上清跑RNA也是能跑出来可以用的条带,一般来说是蛋白污染。
2楼2012-07-16 19:39:51
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yuzengyang

新虫 (初入文坛)

跟老板说说买PCR仪吧
3楼2012-07-16 19:56:31
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18988582

银虫 (正式写手)

我用的是动物的性腺组织
坚持我的!
4楼2012-07-16 20:03:57
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