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银虫 (正式写手)

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专业: 环境污染化学

[求助] 请帮忙分析一下提取RNA遇到的问题

我实验室的Trizol提取RNA，氯仿分层以后，提取上清液，加入异丙醇时，出现大量浑浊悬浮白色沉淀，而且离心后发现管底有一大坨白色物质，量很大，应该不是RNA那种透明的胶状沉淀。这个沉淀很难溶解，我加了500微升的水才完全溶解。
我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！

另外，我又买promega试剂盒Z3100，提取RNA，效果也不是很好，我的下游主要是做PCR。
我以前提的效果很好，不知道这几次到底是什么原因？请帮忙分析一下！

电泳图见附件，第2，3泳道是用Trizol提的，4，5泳道是用试剂盒提的！
如果做PCR的话，后两个泳道的RNA可以用吗？可以直接进行一步法PCR吗？

谢谢！

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坚持我的！

1楼2012-07-16 19:31:38

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sxxyxh

新虫 (初入文坛)

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专业: 水产养殖学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-24 13:41:41

我昨天提RNA也遇到这个问题，并且我们实验室之前也有人遇到这个问题。

目前我的推测是：匀浆时组织加多了。原因：
1.我之前提的脾脏和头肾组织RNA，效果非常好；偏偏提肝脏出这样的问题，我们实验室人出这问题也是在肝脏组织。后来我发现，TaKaRa的RNAiso Plus提RNA，每g脑组织可提取1500μg RNA，每g烟草叶片可提取1000μg RNA，而每g肝脏组织可提高达5000μg的RNA。
2.测浓度时，OD280值并不大，且跑胶时胶孔未见蛋白残留，说明那一大坨白色物质不太可能是蛋白。

另一个可能的原因是：乙醇未除干净，因为OD230较大，而盐离子浓度影响RNA的溶解度。

另外我想问问楼主，加Trizol后匀浆离心后，上层是否漂有白白的颗粒状东西？