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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA提取的几个问题~~~
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jinqimaggie at 2013-07-10 05:06:18
可以考虑在第一次bind柱子时加入等体积的异丙醇提高提取浓度 蛋白质污染，主要还是要照kit上的量加，比如如果你的Rna比较短，要加5-6体积的binding solution（第一步）

我这个KIT吸附第二部是加一个去蛋白液~~
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21楼2013-07-10 14:57:12
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by sstefsun0630 at 2013-07-10 14:03:56
1.我的植物是一年生的草本，我开始取样的时候是长了三个月左右，之后每次是隔一周去一次，应该差别不大的吧~
2.我用的是微量分光光度计，每次取2 uL检测。260的度数大概在2.6左右。用的是原液测的~...

你液氮研磨后粉末有称量再加到裂解液里去吗？
不知你所用分光光度计的准确性很难判断。
另外，5S对OD值影响非常大，有时提到的total RNA中有比较多的5S其OD值也会很高。
建议电泳（根据亮度）对比OD。
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伟大航线....
22楼2013-07-10 16:02:09
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
弱问弱问一下，我最近也准备做的，会不会是降解什么的？？
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23楼2013-07-10 21:51:35
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多交流啊，我是准备构建全长文库的
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24楼2013-07-10 21:52:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
sstefsun0630: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-12 14:32:02
引用回帖:
20楼: Originally posted by sstefsun0630 at 2013-07-10 14:10:32
我这个是要用来做Q-PCR的，我有一次找同学帮我提取了一下我的样品（用一样的东西），结果他提出来260/280有2.1，含量也有160 ng/uL。
像我提出来的这样质量的RNA做Q-PCR应该还可以用的吧？...

RNA的质量用吸光值很难判断，一般是跑胶检测完整性。如果你提的RNA量不多就比较麻烦。如果rRNA降解非常严重就不好了。做q-PCR主要是要根据RNA的浓度反转录一定量的RNA（一般是1μg），如果定量不准回对后面的实验造成一定影响。
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25楼2013-07-10 22:32:47
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by longrna at 2013-07-10 16:02:09
你液氮研磨后粉末有称量再加到裂解液里去吗？
不知你所用分光光度计的准确性很难判断。
另外，5S对OD值影响非常大，有时提到的total RNA中有比较多的5S其OD值也会很高。
建议电泳（根据亮度）对比OD。...

我以前称量过样品，之后都差不多加那么些。
我们的分光光度计应该是比较准确的，大家都用目前没发现有什么问题。
我的电泳结果还行，就是260/280有点儿奇怪~~~
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26楼2013-07-10 22:33:51
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-10 21:51:35
弱问弱问一下，我最近也准备做的，会不会是降解什么的？？

应该不是降解了的，我电泳有两个条带，还是比较符合要求的。我在想可能真的是蛋白有点儿多~
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27楼2013-07-10 22:34:53
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-10 21:52:13
多交流啊，我是准备构建全长文库的

呵呵~~~多交流！共进步啊！
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28楼2013-07-10 22:35:18
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taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用TAKARA的TRIZOL提取吧，试剂盒本来就会降解一些啊，尤其不能用试剂盒来提取MICRORNA
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29楼2013-07-10 22:53:50
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wxf-er

银虫 (正式写手)
测OD值反应的是RNA的纯度，检测有没有DNA或者蛋白质、酚类的污染；跑电泳胶检测的是RNA的完整性，有没有降解。楼主的应该是有杂质未去干净，结合你后续实验，相应处理就成。
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自然
30楼2013-07-25 12:18:40
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