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sstefsun0630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by jinqimaggie at 2013-07-10 05:06:18
可以考虑在第一次bind柱子时加入等体积的异丙醇提高提取浓度 蛋白质污染,主要还是要照kit上的量加,比如如果你的Rna比较短,要加5-6体积的binding solution(第一步)

我这个KIT吸附第二部是加一个去蛋白液~~
21楼2013-07-10 14:57:12
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by sstefsun0630 at 2013-07-10 14:03:56
1.我的植物是一年生的草本,我开始取样的时候是长了三个月左右,之后每次是隔一周去一次,应该差别不大的吧~
2.我用的是微量分光光度计,每次取2 uL检测。260的度数大概在2.6左右。用的是原液测的~...

你液氮研磨后粉末有称量再加到裂解液里去吗?
不知你所用分光光度计的准确性很难判断。
另外,5S对OD值影响非常大,有时提到的total RNA中有比较多的5S其OD值也会很高。
建议电泳(根据亮度)对比OD。
伟大航线....
22楼2013-07-10 16:02:09
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
弱问弱问一下,我最近也准备做的,会不会是降解什么的??
23楼2013-07-10 21:51:35
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多交流啊,我是准备构建全长文库的
24楼2013-07-10 21:52:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
sstefsun0630: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-12 14:32:02
引用回帖:
20楼: Originally posted by sstefsun0630 at 2013-07-10 14:10:32
我这个是要用来做Q-PCR的,我有一次找同学帮我提取了一下我的样品(用一样的东西),结果他提出来260/280有2.1,含量也有160 ng/uL。
像我提出来的这样质量的RNA做Q-PCR应该还可以用的吧?...

RNA的质量用吸光值很难判断,一般是跑胶检测完整性。如果你提的RNA量不多就比较麻烦。如果rRNA降解非常严重就不好了。做q-PCR主要是要根据RNA的浓度反转录一定量的RNA(一般是1μg),如果定量不准回对后面的实验造成一定影响。
25楼2013-07-10 22:32:47
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by longrna at 2013-07-10 16:02:09
你液氮研磨后粉末有称量再加到裂解液里去吗?
不知你所用分光光度计的准确性很难判断。
另外,5S对OD值影响非常大,有时提到的total RNA中有比较多的5S其OD值也会很高。
建议电泳(根据亮度)对比OD。...

我以前称量过样品,之后都差不多加那么些。
我们的分光光度计应该是比较准确的,大家都用目前没发现有什么问题。
我的电泳结果还行,就是260/280有点儿奇怪~~~
26楼2013-07-10 22:33:51
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
23楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-10 21:51:35
弱问弱问一下,我最近也准备做的,会不会是降解什么的??

应该不是降解了的,我电泳有两个条带,还是比较符合要求的。我在想可能真的是蛋白有点儿多~
27楼2013-07-10 22:34:53
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-10 21:52:13
多交流啊,我是准备构建全长文库的

呵呵~~~多交流!共进步啊!
28楼2013-07-10 22:35:18
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taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用TAKARA的TRIZOL提取吧,试剂盒本来就会降解一些啊,尤其不能用试剂盒来提取MICRORNA
29楼2013-07-10 22:53:50
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wxf-er

银虫 (正式写手)

测OD值反应的是RNA的纯度,检测有没有DNA或者蛋白质、酚类的污染;跑电泳胶检测的是RNA的完整性,有没有降解。楼主的应该是有杂质未去干净,结合你后续实验,相应处理就成。
自然
30楼2013-07-25 12:18:40
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