应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于RNA提取的几个问题~~~
302/3返回列表上一页123下一页
查看: 3088  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-09 15:25:20
天根的试剂盒,出问题比较多的有两个地方,一个是裂解液,还有一个是酚.如果裂解液你每次都是整瓶加热的话,可能用了几次以后,再用效果就不好了.另外就是那瓶酚,有的时候他们的饱和酚感觉上面的水封做的不好,用着用着就 ...

加裂解液后我都没有加热过，都是剧烈摇晃然后就直接离心了。实验室的其他同学都是这么做的，也没有出现我这个问题~唉~~我这个试剂盒没有酚。
赞一下 回复此楼
11楼2013-07-09 21:51:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by sstefsun0630 at 2013-07-09 15:07:20
我的植物还是比较年轻的小苗~~~前几天有一次我提的RNA不论是A260/280还是电泳都特别好（取样品量和以前没什么区别）。跟以前唯一不同的是漂洗液是现用现配的，不知道跟这个有关系没有~不过这几次又恢复老样子了。愁 ...

有时候也可能是试剂盒的问题。你是否注意到有试剂过期变质？
赞一下 回复此楼
12楼2013-07-10 00:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinqimaggie

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑在第一次bind柱子时加入等体积的异丙醇提高提取浓度 蛋白质污染，主要还是要照kit上的量加，比如如果你的Rna比较短，要加5-6体积的binding solution（第一步）
赞一下 回复此楼
13楼2013-07-10 05:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sstefsun0630: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-12 14:31:17
1、先说产量 。产量降低你是否能确保每次所用的起始材料一样以及新鲜、老嫩程度一样？否则，批间操作出现差异应该很正常。更重要的是质量。
2、260/280。如果不是OD不准确的话，1.5的比值可能是有蛋白污染（“可能”）。(楼主说的点样孔亮那种情况可能是蛋白残留太多，有时候可能残留不多就不一定看得见点样孔亮了。)是用什么仪器测的OD值？260读数多少？原液测的还是稀释几倍测的？
楼上说的OD值与电泳的对比是指根据OD测出的量上样电泳，其亮度跟预期（OD）是否吻合。这需要经验。
祝实验顺利。
赞一下 回复此楼
伟大航线....
14楼2013-07-10 10:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提rna，尤其是用来构建文库的RNA，最好不要用试剂盒。因为试剂盒是吸附柱，柱子吸附有选择性。所以这样的rna不完全，而且一些大的rna也可能吸附不上，建议用trizol。。按着trizol的说明书做，应该可以提的很好。。提了N多次，都很好。
赞一下 回复此楼
15楼2013-07-10 11:14:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silentyang2

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
A260/280偏低一般是蛋白杂质污染造成的。一般用盒子提主要注意提取样品的生物量不宜太多或者太少，否则影响破碎效果和纯度。提植物的RNA不要用太老的样品。
赞一下 回复此楼
16楼2013-07-10 11:44:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jinqimaggie at 2013-07-10 05:06:18
可以考虑在第一次bind柱子时加入等体积的异丙醇提高提取浓度 蛋白质污染，主要还是要照kit上的量加，比如如果你的Rna比较短，要加5-6体积的binding solution（第一步）

我用的这个Kit，第一次吸附的时候是要吸取400 uL裂解的样品+200 uL无水乙醇。这样要是再加等体积的异丙醇管子盛不下~~~
我们第一步的吸附加的就是无水乙醇~~~说明书上是让加0.5倍体积的。可能跟你那个不太一样~~
赞一下 回复此楼
17楼2013-07-10 13:21:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by longrna at 2013-07-10 10:00:46
1、先说产量 。产量降低你是否能确保每次所用的起始材料一样以及新鲜、老嫩程度一样？否则，批间操作出现差异应该很正常。更重要的是质量。
2、260/280。如果不是OD不准确的话，1.5的比值可能是有蛋白污染（“可能 ...

1.我的植物是一年生的草本，我开始取样的时候是长了三个月左右，之后每次是隔一周去一次，应该差别不大的吧~
2.我用的是微量分光光度计，每次取2 uL检测。260的度数大概在2.6左右。用的是原液测的~
赞一下 回复此楼
18楼2013-07-10 14:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-10 00:49:18
有时候也可能是试剂盒的问题。你是否注意到有试剂过期变质？...

我用新的试剂盒也会出现这样的情况。别人即使在我之后提也比我这个好一点~~~让他们看我操作什么的也没发现有什么问题~~~所以很惆怅~
赞一下 回复此楼
19楼2013-07-10 14:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sstefsun0630

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-10 11:14:31
提rna，尤其是用来构建文库的RNA，最好不要用试剂盒。因为试剂盒是吸附柱，柱子吸附有选择性。所以这样的rna不完全，而且一些大的rna也可能吸附不上，建议用trizol。。按着trizol的说明书做，应该可以提的很好。。提 ...

我这个是要用来做Q-PCR的，我有一次找同学帮我提取了一下我的样品（用一样的东西），结果他提出来260/280有2.1，含量也有160 ng/uL。
像我提出来的这样质量的RNA做Q-PCR应该还可以用的吧？
赞一下 回复此楼
20楼2013-07-10 14:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sstefsun0630 的主题更新
302/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 312求调剂 +6 李鸿飞飞 2026-04-06 6/300 2026-04-12 00:34 by 蓝云思雨
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +19 xaw. 2026-04-11 19/950 2026-04-11 23:20 by labixiaoqiao
[考研] 电子信息270求调剂 +14 terminal469 2026-04-07 14/700 2026-04-11 19:44 by laoshidan
[考研] 求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-10 14/700 2026-04-11 16:02 by vgtyfty
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +4 弱水听文 2026-04-09 4/200 2026-04-10 22:01 by doctff
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +11 振—TZ 2026-04-10 11/550 2026-04-10 21:51 by blankyung
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 青岛科技大学材料学院，环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 301求调剂 +6 静静想想 2026-04-05 6/300 2026-04-10 09:15 by Delta2012
[考研] 332，085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 一志愿华南师范大学0702物理学305调剂 +4 念常安 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:53 by bljnqdcc
[考研] 285求调剂 +12 AZMK 2026-04-05 18/900 2026-04-08 20:43 by 逆水乘风
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 生物医药调剂｜SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 277求调剂 +5 考研调剂lxh 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:03 by chy09050039
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭