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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 秀丽隐杆线虫RNA提取中遇到的问题
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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 秀丽隐杆线虫RNA提取中遇到的问题

我刚做完线虫的RNA提取，结果非常不好，由于是初次接触分子方面的试验，不知道RNA提取过程中都应该注意什么问题，应该如何避免。另外想请教大家有关线虫基因内参片段大小为多少?akt-2,hsp-16.2,hsp-70,tub-1,sod-3,daf-16,skn-1的分子片段各为多少，急求帮忙啊！
另外附上我跑完的电泳结果，这是用不同引物反转录后得到的结果，不知道最前边的条带是什么啊？

PCR结果
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1楼 2012-05-24 18:04:57
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-05-26 08:03:04
RNA抽提主要是放降解
最后测一下OD值1.8左右就行了
这个具体的结果可能你去分子生物学版求助会更好
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

20111987 20111987
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
2楼2012-05-25 20:57:55
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20111987

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jhu132llh at 2012-05-25 20:57:55
RNA抽提主要是放降解
最后测一下OD值1.8左右就行了
这个具体的结果可能你去分子生物学版求助会更好

谢谢您的帮助！
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3楼2012-05-26 08:02:10
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20111987

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jhu132llh at 2012-05-25 20:57:55
RNA抽提主要是放降解
最后测一下OD值1.8左右就行了
这个具体的结果可能你去分子生物学版求助会更好

谢谢您的帮助！
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4楼2012-05-26 08:02:35
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elric

新虫 (著名写手)
直接用RNA试剂盒提的，另外akt-2,hsp-16.2,hsp-70,tub-1,sod-3,daf-16,skn-1的分子片段在wormbase上可查啊
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5楼2012-12-02 03:54:31
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by elric at 2012-12-02 03:54:31
直接用RNA试剂盒提的，另外akt-2,hsp-16.2,hsp-70,tub-1,sod-3,daf-16,skn-1的分子片段在wormbase上可查啊

谢谢您的回复，可以说的再具体点吗？我后来是在别的网站上查到了，但是有的引物还是查不出片段大小，如果能按照楼主教的方法确认一下最好咯
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6楼2012-12-03 20:19:39
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糖粥

新虫 (初入文坛)
秀丽隐杆线虫提取RNA时，要选择成虫，避开产卵期。虫体要用M9洗干净，取30-40微升就可以了，加入1毫升的Trizol,用RNAfree的匀浆器在冰上研磨约3分钟，破碎虫体，接下来就是正常的RNA提取过程了，使用的枪头和EP管都要是RNAfree.提完RNA跑胶的时候用新配置的胶和电泳液，跑出来的条带很亮，很清晰的。你的RNA提取的亮度不行，太弱。
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7楼2013-03-10 20:48:23
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扣扣里

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 糖粥 at 2013-03-10 20:48:23
秀丽隐杆线虫提取RNA时，要选择成虫，避开产卵期。虫体要用M9洗干净，取30-40微升就可以了，加入1毫升的Trizol,用RNAfree的匀浆器在冰上研磨约3分钟，破碎虫体，接下来就是正常的RNA提取过程了，使用的枪头和EP管都 ...

直接在匀浆器里研磨的话，trizol的味道不会很大吗？是不是需要在通风处里进行？
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8楼2021-04-29 19:05:16
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