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松上云雀

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】水稻叶片RNA提取问题

最近提取水稻叶片RNA总是发生降解，不知道什么原因。
跑胶图片显示28S条带没有问题，但是18s下边有降解条带。
提取方法是Trizol法提取，材料是水稻叶片。
大家有什么建议呀？
我把提取RNA的步骤写一下
①用液氮将样品研磨至粉末，取0.1g粉末加入预先装有1ml Trizol的离心管中，摇匀。
②2-8℃下12000g离心10min，将RNA的上清液移入1.5ml离心管中。
③在15-30℃下放置5min，加0.2ml氯仿，剧烈振荡15sec，室温下温浴2-3min。2-8℃下，≤12000g离心15min，把水相移入另一1.5ml离心管中。
④加0.5ml氯仿剧烈振荡15sec，室温下温浴2-3min；2-8℃下，≤12000g离心10min，
⑤取上清，加入500ul异丙醇，沉淀10分钟，12000g离心10min

⑥加入1ml 75%乙醇，2-8℃下≤7500g离心5min，小心将上清液倒掉。
⑦将离心管倒扣在吸水纸上5-10min，每管加30μl的DEPC水，可在55-60℃助溶10min。
最后取2ul电泳。
Trizol使用的是Invitrogen的。

[ Last edited by 松上云雀 on 2011-1-26 at 20:01 ]
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1楼 2011-01-25 21:24:51
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tigertang

木虫 (著名写手)
建议上图，这样大家好分析！
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2楼2011-01-26 07:43:16
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松上云雀

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by tigertang at 2011-01-26 07:43:16:
建议上图，这样大家好分析！

我跑的电泳看了看，没有拍照，直接扔掉了。
跑出来的图片就是18s下边还有多条条带。
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3楼2011-01-26 10:13:36
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amilie030312

金虫 (正式写手)
多酚多糖残留？
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4楼2011-01-26 13:45:40
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
★ ★
翱宇(金币+2): 谢谢分享经验。 2011-01-26 15:08:26
松上云雀(金币+1): 谢谢，我想问下，你们无菌操作台怎么消毒的呀？就是开一开紫外吗？ 2011-01-26 20:02:14
所有不能干热灭菌的，用DEPC水处理24小时以上，其他一律180度干热灭菌4小时。异丙醇等试剂用新的，无菌操作台认真消毒。。
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5楼2011-01-26 14:32:52
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快乐小文文

银虫 (著名写手)
是否Trizol被污染了？
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6楼2011-01-26 18:58:26
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shaquila

金虫 (正式写手)
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2751909
lz是不是如此图
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7楼2011-01-26 22:50:09
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十比

木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-27 11:45:52
松上云雀(金币+1): 非常感谢！ 2011-01-28 06:56:43
18S 下面有多条带，在植物中是正常的吧。我们提的时候也会这样，应该不是降解的问题。
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8楼2011-01-27 11:17:05
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-27 14:28:45
松上云雀(金币+1): 非常感谢! 2011-01-28 06:57:37
我的理解，如果是18s降解，那更大的28s也应该降解，但是28和18如果中间没有明显弥散，5s不是非常亮，应该没问题
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9楼2011-01-27 13:25:42
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松上云雀

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-01-26 22:50:09:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2751909
lz是不是如此图

是的，就是这样的图，只是我同学同样提取水稻叶片的RNA，没有我这种情况，我们材料的区别就是品种不同，生长期不同，不知道是不是这个原因造成的不同结果。
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10楼2011-01-27 15:11:03
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shaquila

金虫 (正式写手)
我觉得是跑电泳的问题，时间长了，就分开了～～
也有人说是叶绿体RNA
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11楼2011-01-27 16:55:16
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shaquila

金虫 (正式写手)
这是我师兄跑得，时间跑得较短，虽然看起来很好，但我觉得它的18s下面也有smear
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12楼2011-01-27 17:07:46
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c20050566

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
哎, 我跑的都有smear 看来是保存RNA 不当.
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13楼2011-12-18 23:54:28
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
条带多，说明提的好
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14楼2011-12-19 09:22:04
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longrna

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我觉得带条多并不说明降解，smear倒很可能是降解。
降解是随机的，所以不应该降解成统一大小的条带。
其实电泳时主要看条带有没有锋利，边缘清不清晰，其次再看条带。
当然了，如果是普通的琼脂糖（非变性）条带边缘有一点点的模糊也可以理解。
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15楼2011-12-19 09:27:22
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额敏的雪

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我用invitragen提水稻叶片RNA，异丙醇沉淀的时候，出现很多絮状物，离心清洗后，这些沉淀根本不溶，何解？
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16楼2014-05-15 19:25:14
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