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gn2003_0金虫 (小有名气)
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【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取质量验证及反转后cDNA质量验证问题 已有3人参与
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我用试剂盒提取棉花RNA，由于新手有相关问题请教，首先是棉花RNA电泳后是不是应该有两条带，而我提取的RNA电泳图片如下（去离子甲酰胺变性，1.2%凝胶电泳） 定量后OD260/280=1.9-2.2之间，当时就做了反转。随后放置一周左右进行电泳验证，结果如下，泳道左侧八个为cDNA质量验证结果，有弥散的条带但是很弱，是不是CDNA质量不行，或者就是当初RNA提取的质量就不好不适合反转呢。 另外下面片子的右侧四个亮的泳道是我放置一周后的RNA质量，结果直接分不开带（我是没有变性直接跑的电泳）  [ Last edited by gn2003_0 on 2010-10-27 at 21:15 ] |
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gn2003_0
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silicare(金币+3):很详细 2010-10-28 11:55:06
gn2003_0(金币+6):你回答的很详细 多谢了 2010-10-30 10:18:46
silicare(金币+3):很详细 2010-10-28 11:55:06
gn2003_0(金币+6):你回答的很详细 多谢了 2010-10-30 10:18:46
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一，RNA电泳时会出现3条带的，不用跑变性胶也行的，我们的RNA就跑正常琼脂糖胶也结果很好的。 二，你的OD值表明你的RNA质量还是可以的，应该不会出现RNA的问题。 三，反转后的电泳DNA弥散而且很不清楚，可能的原因有：从点样到开始跑胶的时间过长DNA弥散了；反转的时候出错了；第二种可能性大。 四，RNA就算在-80度都会降解的，所以如果是在-20度放置一周可能RNA会降解的。 五，个人觉得如果你的RNA是一直在-80度保存的话就再好好做一次反转。 |
8楼2010-10-28 10:37:33
9楼2010-10-28 12:11:04
gn2003_0
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