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xan36

新虫 (小有名气)

[求助] 请问血清RNA怎样提取？又怎样验证已提取出血清RNA？ 已有7人参与

如题：请问血清RNA怎样提取？又怎样验证已提取出血清RNA？
谢谢！！
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风雨后的阳光更珍贵
1楼 2011-11-17 15:43:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): good!鼓励交流! 2011-11-19 18:31:46
人血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点：处理的体积血液体积有限，一般1ml Trizol处理100ul血液，最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞（即淋巴细胞），然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点：只能提取得到淋巴细胞的RNA，血液中游离的如病毒RNA无法提得。

你的血清是直接离心分离的吗?  如果只是做PCR，估计你直接弄200ul加Trizol提取就可以了。如果不行再从长计议。。。


血液是很复杂的。。。
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伟大航线....
4楼2011-11-18 09:52:38
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西湖鸟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

血清RNA含量低，可以用TRIZOL，过程有点麻烦，氯仿毒性较大，我们实验室目前用的是BIOG血清提取试剂，效果与TRIZOL差不多。
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18楼2018-12-03 23:18:25
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普通回帖

longrna

新虫 (正式写手)
有多大体积的血清？什么物种？提到后续实验做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？
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伟大航线....
2楼2011-11-17 16:12:26
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xan36

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 16:12:26:
有多大体积的血清？什么物种？提到后续实验做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？

有1ml左右的血清，是正常人的，想验证下血清中有没有我所要的目的基因，想提出来后做个PCR，要求的话符合PCR扩增的要求就可
谢谢！
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风雨后的阳光更珍贵
3楼2011-11-18 08:32:30
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xan36

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by longrna at 2011-11-18 09:52:38:
人血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法 ...

谢谢您的回复！
我现在是想提出血清中的RNA，也就是外周血经过离心后的上清。
我现在想看下我的目的基因是否在血清中也存在，我用Trizol提取了血清中的RNA，但是不知道是否提出来，怎样检测已经提出血清中的RNA?比如用一种内参，但是好像b-actin不行，因为血清中没有b-actin
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风雨后的阳光更珍贵
5楼2011-11-18 10:01:36
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匿名

用户注销 (正式写手)
xan36(金币+2): 谢谢回复 2011-11-19 08:36:45
本帖仅楼主可见
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6楼2011-11-18 10:52:11
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xan36(金币+2): 谢谢回复！ 2011-11-19 08:36:59
很多公司有RNA的提取试剂盒，可以从血清里面提出RNA，不过量不会太多。质量可以用nadodrop或者分光光度计来测，建议用 nanodrop
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2011-11-18 12:31:02
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dragoner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以跑电泳啊，或者做real-time PCR
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8楼2011-11-19 17:33:25
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longrna

新虫 (正式写手)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-11-21 09:02:26
老实说，1ml的血清 提RNA不好做。。。
产量估计不到1ug，全跑电泳估计勉强可以看得见吧....
不是很理解LZ所说的验证已提取RNA是指什么验证。是指此提取方法行不行得通还是说你怀疑自己的操作？
LZ提出RNA要怎么处置她啊？不妨就以那个来验证呗
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伟大航线....
9楼2011-11-19 21:24:10
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xan36

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by longrna at 2011-11-19 21:24:10:
老实说，1ml的血清 提RNA不好做。。。
产量估计不到1ug，全跑电泳估计勉强可以看得见吧....
不是很理解LZ所说的验证已提取RNA是指什么验证。是指此提取方法行不行得通还是说你怀疑自己的操作？
LZ提出RNA要怎么 ...

谢谢回复~
我是想验证下血清中有没有我所检测的目的基因。
因为血清中RNA含量肯定很微量，而且现在通过扩增的结果是阴性的，为了排除并不是血清中不存在我的基因而不是RNA根本没有提取出来，我想验证下RNA是否成功提取。
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风雨后的阳光更珍贵
10楼2011-11-20 09:36:34
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