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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问血清RNA怎样提取？又怎样验证已提取出血清RNA？
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xan36

新虫 (小有名气)

[求助] 请问血清RNA怎样提取？又怎样验证已提取出血清RNA？ 已有7人参与

如题：请问血清RNA怎样提取？又怎样验证已提取出血清RNA？
谢谢！！
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风雨后的阳光更珍贵
1楼 2011-11-17 15:43:53
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): good!鼓励交流! 2011-11-19 18:31:46
人血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点：处理的体积血液体积有限，一般1ml Trizol处理100ul血液，最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞（即淋巴细胞），然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点：只能提取得到淋巴细胞的RNA，血液中游离的如病毒RNA无法提得。

你的血清是直接离心分离的吗?  如果只是做PCR，估计你直接弄200ul加Trizol提取就可以了。如果不行再从长计议。。。


血液是很复杂的。。。
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伟大航线....
4楼2011-11-18 09:52:38
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longrna

新虫 (正式写手)
有多大体积的血清？什么物种？提到后续实验做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？
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伟大航线....
2楼2011-11-17 16:12:26
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xan36

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 16:12:26:
有多大体积的血清？什么物种？提到后续实验做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？

有1ml左右的血清，是正常人的，想验证下血清中有没有我所要的目的基因，想提出来后做个PCR，要求的话符合PCR扩增的要求就可
谢谢！
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风雨后的阳光更珍贵
3楼2011-11-18 08:32:30
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xan36

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by longrna at 2011-11-18 09:52:38:
人血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法 ...

谢谢您的回复！
我现在是想提出血清中的RNA，也就是外周血经过离心后的上清。
我现在想看下我的目的基因是否在血清中也存在，我用Trizol提取了血清中的RNA，但是不知道是否提出来，怎样检测已经提出血清中的RNA?比如用一种内参，但是好像b-actin不行，因为血清中没有b-actin
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风雨后的阳光更珍贵
5楼2011-11-18 10:01:36
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