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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA提取中所用液体怎么处理才能灭活RNAase
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dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RNA提取中所用液体怎么处理才能灭活RNAase已有6人参与

请问虫同胞们
RNA提取中所用液体（氯仿、异丙醇、去离子水、乙醇和SDS等）需要处理以灭活RNAase吗？
如果需要，那用什么方法呢？用DEPC还是另有别的办法？
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1楼2010-05-28 17:30:24
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-28 22:55:03
DD水加DEPC搅拌过夜后高压灭菌，枪头离心管也一样。玻璃器皿180度烘过夜

有机试剂不需要处理，条件允许最好单独准备，不要跟别的实验混用。
如果你不是样品超多或者实验经费很紧张推荐用trizol或者各种山寨版本，比较方便
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2楼2010-05-28 18:01:47
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dongfangzz

银虫 (小有名气)
scelab:大胆的问就是了，谁都不是‘生而知之’的，从来都是生而学之！ 2010-05-28 22:55:44
1、为什么有机溶剂不用DEPC处理呀，其中也可能有RNase呀？
2、操作过程中所加的糖原又怎么处理以去除RNase呢？

我是新手，让大家见笑了
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3楼2010-05-28 22:05:04
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-29 08:53:57
1.有机试剂本身就是蛋白的变性剂，RNAse是蛋白在有机试剂中就失去了其功能。
2.至于糖原嘛，个人认为是不是可以用DEPC搅拌呢？
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4楼2010-05-28 23:41:44
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genomelin

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
糖原不用去除RNAase吧。再说只有量很少的时候用最后加糖原共沉淀，RNA量多的时候不用，其实RNA还是很禁得住折腾的
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5楼2010-05-29 01:10:39
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commandmp5

金虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-29 08:54:23
你都用depc水新鲜配制吧
有机的的确不用depc处理 你觉得氯仿里面还能有有活性的蛋白么
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6楼2010-05-29 04:55:54
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小白求教：提取RNA为什么要加糖原啊？
另外看你的RNA用来干什么，如果只是克隆基因或者做个普通的半定量PCR，其实不需要多么严格，有时候嫌麻烦所有的东西两次高压灭菌就直接用了。
如果你要做RACE，real-time这种实验即使认真的按照protocal做，提出来的RNA都经常不符合要求。

[ Last edited by lzhwin on 2010-5-29 at 08:58 ]
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7楼2010-05-29 08:56:36
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commandmp5

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
糖原不知道啊 没听说过要加
做race等等的 不要求你用RNA的质量很多 所以可以使用试剂盒
大量的还是用trizol
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8楼2010-05-29 09:36:08
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2010-05-29 08:56:36:
小白求教：提取RNA为什么要加糖原啊？
另外看你的RNA用来干什么，如果只是克隆基因或者做个普通的半定量PCR，其实不需要多么严格，有时候嫌麻烦所有的东西两次高压灭菌就直接用了。
如果你要做RACE，real-time这 ...

加糖原是用来沉淀RNA的，糖原就是用来沉淀核酸的吧，但是一般用异丙醇、一定浓度的乙醇好像就可以了。
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9楼2010-05-29 09:46:52
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