24小时热门版块排行榜    

查看: 3453  |  回复: 14
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 adslye 的 17 个金币 ,回帖就立即获得 1 个金币,每人有 1 次机会

adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币!!!

我是用异硫氰酸胍法提RNA。大概过程:
异硫氰酸胍提取液提取----酚氯仿异戊醇(提2次)再氯仿异戊醇提1次------异丙醇沉淀---乙醇洗。
RNA都能提出来(260/280:1.73),有点降解,也有DNA污染。
现在不知道DNA主要在哪污染的?是酚氯仿萃取的时候除DNA吧。
各位,除了用DNA酶处理,还有什么办法?
或者是你们提的办法?

回帖就送金币!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

adslye

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-10-28 11:53:23:
PH值多少?

PH4.0的 提取液和醋酸钠都是4.0。 酚就直接用的水饱和的,具体精确的PH就不知道了。我也感觉PH有问题。
分开DNA就靠这PH了。离心后,吸上清应该操作没问题,到中间了都会宁愿浪费点也不吸了。
6楼2010-10-28 21:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-28 12:03:35
就我的经验,提RNA时有DNA的污染时很难避免的。一般就用DNA酶处理。酚氯仿萃取对去DNA没有作用。
2楼2010-10-28 10:53:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


adslye(金币+1):谢谢参与
PH值多少?
3楼2010-10-28 11:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuxian1

银虫 (小有名气)

★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:37:25
在RNA的提取过程要避免剧烈振荡,使得蛋白和DNA脱离,DNA会释放到水相。不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧烈的震荡,很容易使得DNA的亲水基团,与水相接触。所以不要剧烈震荡。
我与你一起闯天下
4楼2010-10-28 13:38:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ww9928

新虫 (初入文坛)


adslye(金币+1):谢谢参与
多提几管,先用TRIZOL提一遍,几管合起来,加DNA酶消化,之后再从头提一遍,基本就可以了
5楼2010-10-28 13:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:38:08
发好文章都需要用DNA酶处理的,你不想处理,做realtime类似的检测只能靠跨内含子的引物,或者UTP的金牌酶了
7楼2010-10-28 22:02:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:38:16
恩,一般都是DNA酶处理的,呵呵,毕竟后面要做反转定量嘛,相对而言后面的试剂要贵很多,而且时间也浪费不起,所以前面的DNA酶一定是要加的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2010-10-28 22:08:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangfangwh

银虫 (著名写手)


adslye(金币+1):谢谢参与
no ide.......
go head
9楼2010-10-28 22:33:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

singingriver

金虫 (正式写手)


adslye(金币+1):谢谢参与
学习一下啊
有志者事竟成
10楼2010-10-28 22:59:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 adslye 的主题更新
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴,则可能无法领取此贴金币
普通表情 高级回复(可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 25考研调剂上岸必进扣裙:601404816,6W+条最新考研调剂信息实时更新 +3 55486844 2024-12-22 60/3000 2024-12-23 03:18 by 55486844
[硕博家园] 寻45-50的博士教授 +9 大发财树 2024-12-22 9/450 2024-12-23 00:24 by 雪径踏青
[硕博家园] 读研之后发现: 圈子变得越来越小了... +13 丁柯翔鸭 2024-12-19 18/900 2024-12-22 23:06 by 丁柯翔鸭
[找工作] 柔引引进博士硕士。 +19 大发财树 2024-12-18 19/950 2024-12-22 21:29 by vincentkaka
[考博] 读博的欲望达到了巅峰 +16 小丸九 2024-12-17 16/800 2024-12-22 21:00 by 流..
[基金申请] 大论文改改变成项目申请书 +4 wusiqi2020 2024-12-21 4/200 2024-12-22 19:48 by 阿凡达C
[考博] 2025申博求助 +7 125814 2024-12-22 7/350 2024-12-22 17:07 by 毕生所学
[论文投稿] 投稿期刊 5+4 王丽媛西西西 2024-12-17 7/350 2024-12-22 04:44 by yudaoqian88
[论文投稿] sci二区的审稿周期 22+5 分外含晴 2024-12-16 12/600 2024-12-21 23:02 by 分外含晴
[硕博家园] 招聘博士 +7 大发财树 2024-12-18 8/400 2024-12-21 16:17 by yanjiaming
[教师之家] 你们都降薪了吗? +10 红枣葡萄干 2024-12-18 10/500 2024-12-20 17:32 by 开心就好56
[考博] 有偿聘请兼职硕士 +10 大发财树 2024-12-19 10/500 2024-12-20 17:30 by mopsite
[论文投稿] 论文校稿 50+5 whale_full 2024-12-17 10/500 2024-12-20 16:39 by 北京莱茵润色
[有机交流] 请问液溴开封后没有密封,放一年会变质吗? +9 rommel1975 2024-12-16 9/450 2024-12-20 11:01 by 2005127239
[论文投稿] Molecular Crystals and Liquid Crystals投稿8个月没有信息 +4 书剑如风 2024-12-17 12/600 2024-12-20 04:40 by 胖胖的大海
[论文投稿] 求推荐5分二区以上肿瘤接受生信结合实验的期刊。。。 +3 lice_1987 2024-12-17 6/300 2024-12-19 17:01 by Andy_124
[教师之家] 删了哦 (EPI+-1)(金币-50) +5 原因在哪里 2024-12-18 6/300 2024-12-19 12:25 by keikofans
[论文投稿] 论文投稿 +4 @星尘@ 2024-12-17 6/300 2024-12-19 09:39 by YXLSYJK
[论文投稿] 毕业论文疑虑 20+6 风吹荷叶煞 2024-12-17 17/850 2024-12-18 17:35 by holypower
[公派出国] 意大利帕多瓦大学招收CSC博士生--光电催化材料在新能源及可持续绿色化学方向 +3 huangyuxing2 2024-12-16 3/150 2024-12-17 18:25 by zhizhan127
信息提示
请填处理意见