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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币!!!

我是用异硫氰酸胍法提RNA。大概过程:
异硫氰酸胍提取液提取----酚氯仿异戊醇(提2次)再氯仿异戊醇提1次------异丙醇沉淀---乙醇洗。
RNA都能提出来(260/280:1.73),有点降解,也有DNA污染。
现在不知道DNA主要在哪污染的?是酚氯仿萃取的时候除DNA吧。
各位,除了用DNA酶处理,还有什么办法?
或者是你们提的办法?

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adslye

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-10-28 11:53:23:
PH值多少?

PH4.0的 提取液和醋酸钠都是4.0。 酚就直接用的水饱和的,具体精确的PH就不知道了。我也感觉PH有问题。
分开DNA就靠这PH了。离心后,吸上清应该操作没问题,到中间了都会宁愿浪费点也不吸了。
6楼2010-10-28 21:53:29
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普通回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-28 12:03:35
就我的经验,提RNA时有DNA的污染时很难避免的。一般就用DNA酶处理。酚氯仿萃取对去DNA没有作用。
2楼2010-10-28 10:53:28
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主


adslye(金币+1):谢谢参与
PH值多少?
3楼2010-10-28 11:53:23
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shuxian1

银虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:37:25
在RNA的提取过程要避免剧烈振荡,使得蛋白和DNA脱离,DNA会释放到水相。不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧烈的震荡,很容易使得DNA的亲水基团,与水相接触。所以不要剧烈震荡。
我与你一起闯天下
4楼2010-10-28 13:38:36
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ww9928

新虫 (初入文坛)


adslye(金币+1):谢谢参与
多提几管,先用TRIZOL提一遍,几管合起来,加DNA酶消化,之后再从头提一遍,基本就可以了
5楼2010-10-28 13:58:02
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:38:08
发好文章都需要用DNA酶处理的,你不想处理,做realtime类似的检测只能靠跨内含子的引物,或者UTP的金牌酶了
7楼2010-10-28 22:02:33
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:38:16
恩,一般都是DNA酶处理的,呵呵,毕竟后面要做反转定量嘛,相对而言后面的试剂要贵很多,而且时间也浪费不起,所以前面的DNA酶一定是要加的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2010-10-28 22:08:39
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yangfangwh

银虫 (著名写手)


adslye(金币+1):谢谢参与
no ide.......
go head
9楼2010-10-28 22:33:22
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singingriver

金虫 (正式写手)


adslye(金币+1):谢谢参与
学习一下啊
有志者事竟成
10楼2010-10-28 22:59:25
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