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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币！！！
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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】异硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA残留问题~回帖就送币！！！

我是用异硫氰酸胍法提RNA。大概过程：
异硫氰酸胍提取液提取----酚氯仿异戊醇（提2次）再氯仿异戊醇提1次------异丙醇沉淀---乙醇洗。
RNA都能提出来（260/280:1.73），有点降解，也有DNA污染。
现在不知道DNA主要在哪污染的？是酚氯仿萃取的时候除DNA吧。
各位，除了用DNA酶处理，还有什么办法？
或者是你们提的办法？

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1楼 2010-10-28 10:41:24
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adslye

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-10-28 11:53:23:
PH值多少？

PH4.0的 提取液和醋酸钠都是4.0。 酚就直接用的水饱和的，具体精确的PH就不知道了。我也感觉PH有问题。
分开DNA就靠这PH了。离心后，吸上清应该操作没问题，到中间了都会宁愿浪费点也不吸了。
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6楼2010-10-28 21:53:29
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普通回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-28 12:03:35
就我的经验，提RNA时有DNA的污染时很难避免的。一般就用DNA酶处理。酚氯仿萃取对去DNA没有作用。
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2楼2010-10-28 10:53:28
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
adslye(金币+1):谢谢参与
PH值多少？
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3楼2010-10-28 11:53:23
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shuxian1

银虫 (小有名气)
★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:37:25
在RNA的提取过程要避免剧烈振荡，使得蛋白和DNA脱离，DNA会释放到水相。不管有酚也好，没有酚也好，氯仿本身也对蛋白有变性作用，剧烈的震荡，很容易使得DNA的亲水基团，与水相接触。所以不要剧烈震荡。
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我与你一起闯天下
4楼2010-10-28 13:38:36
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ww9928

新虫 (初入文坛)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
多提几管，先用TRIZOL提一遍，几管合起来，加DNA酶消化，之后再从头提一遍，基本就可以了
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5楼2010-10-28 13:58:02
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:38:08
发好文章都需要用DNA酶处理的，你不想处理，做realtime类似的检测只能靠跨内含子的引物，或者UTP的金牌酶了
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7楼2010-10-28 22:02:33
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
adslye(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-28 22:38:16
恩，一般都是DNA酶处理的，呵呵，毕竟后面要做反转定量嘛，相对而言后面的试剂要贵很多，而且时间也浪费不起，所以前面的DNA酶一定是要加的。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2010-10-28 22:08:39
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yangfangwh

银虫 (著名写手)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
no ide.......
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go head
9楼2010-10-28 22:33:22
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singingriver

金虫 (正式写手)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
学习一下啊
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有志者事竟成
10楼2010-10-28 22:59:25
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