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gn2003_0

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取质量验证及反转后cDNA质量验证问题 已有3人参与

我用试剂盒提取棉花RNA,由于新手有相关问题请教,首先是棉花RNA电泳后是不是应该有两条带,而我提取的RNA电泳图片如下(去离子甲酰胺变性,1.2%凝胶电泳)

定量后OD260/280=1.9-2.2之间,当时就做了反转。随后放置一周左右进行电泳验证,结果如下,泳道左侧八个为cDNA质量验证结果,有弥散的条带但是很弱,是不是CDNA质量不行,或者就是当初RNA提取的质量就不好不适合反转呢。
另外下面片子的右侧四个亮的泳道是我放置一周后的RNA质量,结果直接分不开带(我是没有变性直接跑的电泳)


[ Last edited by gn2003_0 on 2010-10-27 at 21:15 ]
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gn2003_0

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2010-10-28 10:37:33:
一,RNA电泳时会出现3条带的,不用跑变性胶也行的,我们的RNA就跑正常琼脂糖胶也结果很好的。
二,你的OD值表明你的RNA质量还是可以的,应该不会出现RNA的问题。
三,反转后的电泳DNA弥散而且很不清楚,可能的原 ...

你好 那么一般检测CDNA质量你用多大浓度的胶,跑多长时间电泳?多谢
10楼2010-10-30 10:21:08
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gn2003_0

金虫 (小有名气)

没人回复么 自己顶一下
2楼2010-10-27 21:37:00
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-10-27 23:15:18
gn2003_0(金币+2):多谢 后四空调低亮度还可以分开条带,我得cDNA质量可以继续RT 么? 2010-10-28 09:50:42
cDNA质量的好坏可以根据RT-PCR的结果判断,后四空的RNA浓度大,你在凝胶成像仪中照相的时候可以将亮度调暗一些,看看条带是不是可以分开。
3楼2010-10-27 22:40:10
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won7

金虫 (小有名气)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-10-27 23:15:25
gn2003_0(金币+2):多谢指导 2010-10-28 09:49:30
正常情况下,RNA电泳有3条带。上图提取的RNA可能有DNA污染,盐离子浓度也比较高。但做普通RT-PCR还是没有问题的。下图RNA降解比较严重。
4楼2010-10-27 22:45:48
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