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松上云雀

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】水稻叶片RNA提取问题

最近提取水稻叶片RNA总是发生降解,不知道什么原因。
跑胶图片显示28S条带没有问题,但是18s下边有降解条带。
提取方法是Trizol法提取,材料是水稻叶片。
大家有什么建议呀?
我把提取RNA的步骤写一下
①用液氮将样品研磨至粉末,取0.1g粉末加入预先装有1ml Trizol的离心管中,摇匀。
②2-8℃下12000g离心10min,将RNA的上清液移入1.5ml离心管中。
③在15-30℃下放置5min,加0.2ml氯仿,剧烈振荡15sec,室温下温浴2-3min。2-8℃下,≤12000g离心15min,把水相移入另一1.5ml离心管中。
④加0.5ml氯仿剧烈振荡15sec,室温下温浴2-3min;2-8℃下,≤12000g离心10min,
⑤取上清,加入500ul异丙醇,沉淀10分钟,12000g离心10min

⑥加入1ml 75%乙醇,2-8℃下≤7500g离心5min,小心将上清液倒掉。
⑦将离心管倒扣在吸水纸上5-10min,每管加30μl的DEPC水,可在55-60℃助溶10min。
最后取2ul电泳。
Trizol使用的是Invitrogen的。

[ Last edited by 松上云雀 on 2011-1-26 at 20:01 ]
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rioarsenal

金虫 (正式写手)


★ ★
翱宇(金币+2): 谢谢分享经验。 2011-01-26 15:08:26
松上云雀(金币+1): 谢谢,我想问下,你们无菌操作台怎么消毒的呀?就是开一开紫外吗? 2011-01-26 20:02:14
所有不能干热灭菌的,用DEPC水处理24小时以上,其他一律180度干热灭菌4小时。异丙醇等试剂用新的,无菌操作台认真消毒。。
5楼2011-01-26 14:32:52
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tigertang

木虫 (著名写手)


建议上图,这样大家好分析!
2楼2011-01-26 07:43:16
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松上云雀

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by tigertang at 2011-01-26 07:43:16:
建议上图,这样大家好分析!

我跑的电泳看了看,没有拍照,直接扔掉了。
跑出来的图片就是18s下边还有多条条带。
3楼2011-01-26 10:13:36
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快乐小文文

银虫 (著名写手)


是否Trizol被污染了?
6楼2011-01-26 18:58:26
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