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【求助/交流】水稻叶片RNA提取问题
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最近提取水稻叶片RNA总是发生降解，不知道什么原因。 跑胶图片显示28S条带没有问题，但是18s下边有降解条带。 提取方法是Trizol法提取，材料是水稻叶片。 大家有什么建议呀？ 我把提取RNA的步骤写一下 ①用液氮将样品研磨至粉末，取0.1g粉末加入预先装有1ml Trizol的离心管中，摇匀。 ②2-8℃下12000g离心10min，将RNA的上清液移入1.5ml离心管中。 ③在15-30℃下放置5min，加0.2ml氯仿，剧烈振荡15sec，室温下温浴2-3min。2-8℃下，≤12000g离心15min，把水相移入另一1.5ml离心管中。 ④加0.5ml氯仿剧烈振荡15sec，室温下温浴2-3min；2-8℃下，≤12000g离心10min， ⑤取上清，加入500ul异丙醇，沉淀10分钟，12000g离心10min ⑥加入1ml 75%乙醇，2-8℃下≤7500g离心5min，小心将上清液倒掉。 ⑦将离心管倒扣在吸水纸上5-10min，每管加30μl的DEPC水，可在55-60℃助溶10min。 最后取2ul电泳。 Trizol使用的是Invitrogen的。 [ Last edited by 松上云雀 on 2011-1-26 at 20:01 ] |
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