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你是我的幸福

新虫 (正式写手)

[交流] RNA提取相关问题已有7人参与

提取出来的RNA,用Nanodrop 2000测浓度为1100ng/微升, 看到吸收峰也很好,260处峰值最高,A260/A280为2.0。可是电泳检测结果很奇怪,不是很清晰的三条带,而是模糊一片,这是不是说明RNA降解了?
  前面加完TRIZOL我是用匀浆的方法来做的,之前用23000转匀浆,提出的RNA跑电泳是有清晰的3条带,而这次换了一个匀浆机,用大概25000的转速,提出来就成这样了。
   不知道这种情况是不是和匀浆的转速有关呢?
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-19 10:54:33
有可能你跑胶过程中降解了
2楼2013-06-19 09:34:56
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-19 10:54:41
可以对提取的RNA跑个甲醛变性胶试试看,如果还是这样就是降解了
Tobeornottobe,that'saproblem
3楼2013-06-19 09:42:38
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shzhao113

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2013-06-19 09:45:59
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-06-19 09:34:56
有可能你跑胶过程中降解了

你好!之前也跑过胶,都是很清晰的两条带,这次也担心过跑胶过程降解,所以,换了电泳缓冲液,其他也注意了一下,还是那样。
  现在我们怀疑是因为匀浆力度太大,导致RNA降解了
5楼2013-06-20 08:52:30
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shzhao113 at 2013-06-19 09:45:59
你做对比了吗?

做过对比,之前用2万转没提出来,这次用2万5千转,提出来浓度最高达到1200了,可是就是电泳是模糊一片的
6楼2013-06-20 08:53:46
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by niushuaiji at 2013-06-19 09:42:38
可以对提取的RNA跑个甲醛变性胶试试看,如果还是这样就是降解了

这个可以试一下
7楼2013-06-20 08:54:00
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shzhao113

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

8楼2013-06-20 09:17:43
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lonerice

专家顾问 (著名写手)

水稻生理学专家


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
离心应该不是主要问题。那个步奏引起讲解了应该。
评论、责怪、担忧-最浪费生命
9楼2013-06-20 09:40:03
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andywang6137

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-29 20:10:57
电泳一篇模糊,肯定是降解了,你觉得跑胶没问题,那很可能就如你所说,转速过大。我们一般都是12000rpm,你的都是我们2倍过了。
10楼2013-06-20 10:34:30
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