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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取相关问题
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)

[交流] RNA提取相关问题 已有7人参与

提取出来的RNA，用Nanodrop 2000测浓度为1100ng/微升, 看到吸收峰也很好，260处峰值最高，A260/A280为2.0。可是电泳检测结果很奇怪，不是很清晰的三条带，而是模糊一片，这是不是说明RNA降解了？
  前面加完TRIZOL我是用匀浆的方法来做的，之前用23000转匀浆，提出的RNA跑电泳是有清晰的3条带，而这次换了一个匀浆机，用大概25000的转速，提出来就成这样了。
   不知道这种情况是不是和匀浆的转速有关呢？
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1楼 2013-06-19 09:10:36
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-19 10:54:33
有可能你跑胶过程中降解了
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2楼2013-06-19 09:34:56
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-19 10:54:41
可以对提取的RNA跑个甲醛变性胶试试看，如果还是这样就是降解了
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Tobeornottobe,that'saproblem
3楼2013-06-19 09:42:38
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shzhao113

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-06-19 09:45:59
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-06-19 09:34:56
有可能你跑胶过程中降解了

你好！之前也跑过胶，都是很清晰的两条带，这次也担心过跑胶过程降解，所以，换了电泳缓冲液，其他也注意了一下，还是那样。
  现在我们怀疑是因为匀浆力度太大，导致RNA降解了
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5楼2013-06-20 08:52:30
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shzhao113 at 2013-06-19 09:45:59
你做对比了吗？

做过对比，之前用2万转没提出来，这次用2万5千转，提出来浓度最高达到1200了，可是就是电泳是模糊一片的
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6楼2013-06-20 08:53:46
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你是我的幸福

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by niushuaiji at 2013-06-19 09:42:38
可以对提取的RNA跑个甲醛变性胶试试看，如果还是这样就是降解了

这个可以试一下
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7楼2013-06-20 08:54:00
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shzhao113

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
8楼2013-06-20 09:17:43
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lonerice

专家顾问 (著名写手)

水稻生理学专家
★
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离心应该不是主要问题。那个步奏引起讲解了应该。
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评论、责怪、担忧-最浪费生命
9楼2013-06-20 09:40:03
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andywang6137

木虫 (著名写手)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-29 20:10:57
电泳一篇模糊，肯定是降解了，你觉得跑胶没问题，那很可能就如你所说，转速过大。我们一般都是12000rpm，你的都是我们2倍过了。
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10楼2013-06-20 10:34:30
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