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昆虫触角总RNA提取疑问
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我现在在提取蛾子触角的总RNA，采用的试剂是Trizol，提取后电泳检测，结果都是只有一条带，大概在900bp左右，已反复试验几次，得到的结果都是一样的，只有一条带900bp左右。电泳图见附图1. 为了验证我提取的产物是否为DNA，我同时提取了总DNA，电泳后发现有两条带，一条在2000bp以上，一条在在900bp左右。电泳图见附图2. 后来，我又用了柱式动物组织总RNA提取纯化试剂盒，按说明书的操作进行，最后提取的产物跑胶后也只有一条带，大小在2000bp以上，与总DNA电泳的上层条带大致位置相同。见图3. 根据得到的结果推测，两种RNA提取方法，可能只是提取出特定大小的基因组DNA。但我不明白，为什么按提RNA的方法只能提出DNA，还只有这特定的大小？RNA又在哪呢？ 注：在提取的过程中，为了使裂解更充分，我用Trizol处理的时间为冰上静置半小时。为了使RNA沉淀更充分，我加异丙醇后，30℃温育30min。加氯仿后吸取的上清液是透明的，但异丙醇沉淀后就出现了黑色的杂质，看不到白色的RNA沉淀。 不明白是什么原因。 请有经验的帮忙分析一下，感激不尽！！！  图1  图2  图3 |
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，不必看提取的RNA分子量的，没有意义。实际上表明上也是为了看提取的28S和18S的情况，来估计总RNA的情况。楼主的情况不于重复提取，应该仔细思考每个提取过程，从材料收集、保存、研磨是否充分等等，最重要的是预防RNA酶，这个最重要了。祝实验找到问题所在，加油！ 6楼2012-04-01 20:31:53
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