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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 昆虫触角总RNA提取疑问
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含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] 昆虫触角总RNA提取疑问

我现在在提取蛾子触角的总RNA，采用的试剂是Trizol，提取后电泳检测，结果都是只有一条带，大概在900bp左右，已反复试验几次，得到的结果都是一样的，只有一条带900bp左右。电泳图见附图1.
为了验证我提取的产物是否为DNA，我同时提取了总DNA，电泳后发现有两条带，一条在2000bp以上，一条在在900bp左右。电泳图见附图2.
后来，我又用了柱式动物组织总RNA提取纯化试剂盒，按说明书的操作进行，最后提取的产物跑胶后也只有一条带，大小在2000bp以上，与总DNA电泳的上层条带大致位置相同。见图3.
根据得到的结果推测，两种RNA提取方法，可能只是提取出特定大小的基因组DNA。但我不明白，为什么按提RNA的方法只能提出DNA，还只有这特定的大小？RNA又在哪呢？
注：在提取的过程中，为了使裂解更充分，我用Trizol处理的时间为冰上静置半小时。为了使RNA沉淀更充分，我加异丙醇后，30℃温育30min。加氯仿后吸取的上清液是透明的，但异丙醇沉淀后就出现了黑色的杂质，看不到白色的RNA沉淀。
不明白是什么原因。 请有经验的帮忙分析一下，感激不尽！！！

图1



图2



图3
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努力，奋斗，拼搏。。。
1楼 2012-03-29 21:55:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
光看大小未必正确，可以试试用DNA酶消化，看看是不是DNA哦。
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3楼2012-03-30 02:31:01
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普通回帖

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
太诡异了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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我就是我
2楼2012-03-30 00:49:01
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高飞12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-04-02 11:30:02
含羞草liu: 金币+1 2012-04-25 14:26:24
我没有单独提取触角，但是经常提取小菜蛾幼虫的RNA，没有出现过以上现象，只是28s:18s差不多1:2。我个人认为你说“为了沉淀更充分，加异丙醇后，30℃温育30min”时间太久了吧，而且还是30°，我们实验室一般都是常温10min，RNA提取过程本来都要相对快速的，所以我觉得这步不大合理。个人意见~
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4楼2012-03-31 14:10:53
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装子516

铁虫 (初入文坛)
我也来学习学习！
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5楼2012-03-31 17:27:24
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浮云翩跹

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-02 11:30:17
我提过蛾子的RNA，不过没出现过1条带的时候，看Marker的电泳情况，带应该跑的很开了，不会出现聚在一起的情况。你的DNA条带跑的倒是挺像RNA的，不必看提取的RNA分子量的，没有意义。实际上表明上也是为了看提取的28S和18S的情况，来估计总RNA的情况。楼主的情况不于重复提取，应该仔细思考每个提取过程，从材料收集、保存、研磨是否充分等等，最重要的是预防RNA酶，这个最重要了。祝实验找到问题所在，加油！
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我是来学习的，请多多关照
6楼2012-04-01 20:31:53
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
含羞草liu: 金币+1, ★有帮助 2012-04-25 14:27:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by 高飞12 at 2012-03-31 14:10:53:
我没有单独提取触角，但是经常提取小菜蛾幼虫的RNA，没有出现过以上现象，只是28s:18s差不多1:2。我个人认为你说“为了沉淀更充分，加异丙醇后，30℃温育30min”时间太久了吧，而且还是30°，我们实验室一般都是常 ...

非常同意！
加异丙醇沉淀一般是在冰上或者室温，30℃温度太高啦~首先是RNA容易降解，其次是不利于沉淀。30min有点久，一般5~10min就足够了。不过，最大的问题还是那个30℃！
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7楼2012-04-02 11:32:37
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hucuiyao

新虫 (小有名气)
同意楼上的说法。我提的是虫体的rna，也是室温的
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yichongweiban
8楼2012-05-04 13:00:02
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
我估计是你在收取上清的时候，吸到了中层溶液！
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9楼2012-09-04 09:54:58
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lankou2007

铜虫 (初入文坛)
我想问下楼主
一般你加1ml的trizol  你需要的触角要多少对？

我都觉得舍不得加这么大的样来做电泳
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10楼2013-04-13 21:48:11
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