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biofeixue

木虫 (著名写手)

[交流] 用来沉淀RNA的75％乙醇的DEPC水是用哪种方法配制的？

用来沉淀RNA的75％乙醇的DEPC水是用以下哪种方法配制的？
1.  100ml锥形瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压。提RNA时，再用100%的乙醇与DEPC水按3：1的体积比配置；
2.  先配置DEPC水，不用灭菌。再用100%的乙醇与DEPC水按3：1的体积比配置；一段时间（一般12小时左右）后再高压灭菌。
请问哪种方法好？第二种高压后，乙醇还能是75%吗？
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1楼 2011-05-29 06:42:53
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cdl007

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
biofeixue(金币+1):谢谢参与
biofeixue(金币+2): 2011-05-29 08:05:20
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-05-29 09:34:45
当然是灭depc水，后与乙醇配制。

要求一般是乙醇要新开瓶的，包括异丙醇。氯仿等，最好都是新开瓶的
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3楼2011-05-29 07:48:54
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风雪苍鹰

银虫 (初入文坛)
★ ★
biofeixue(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 乙醇过滤即可 2011-06-02 20:22:43
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-29 06:42:53:
用来沉淀RNA的75％乙醇的DEPC水是用以下哪种方法配制的？
1.  100ml锥形瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压。提RNA时，再用100%的乙醇与DEPC水按3：1的体积比配置；
2.  先配置DEPC水，不用灭菌 ...

高压乙醇，你还想活么？
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4楼2011-05-29 10:03:50
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muzihai

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 对头 2011-06-02 20:22:13
我最近也提取RNA，先配的DEPC水高压之后配75%乙醇，一般都现配现用，感觉还行
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5楼2011-05-29 10:52:05
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-05-29 18:11:42
1%的DEPC,双蒸水或者超纯水吧,然后摇匀,我一般过夜摇,然后,拿去高压,就成了DEPC处理的水了,然后再和无水乙醇配成75%乙醇,洗RNA沉淀~
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6楼2011-05-29 10:56:33
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biofeixue

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by mamadexiao at 2011-05-29 10:56:33:
1%的DEPC,双蒸水或者超纯水吧,然后摇匀,我一般过夜摇,然后,拿去高压,就成了DEPC处理的水了,然后再和无水乙醇配成75%乙醇,洗RNA沉淀~

请问你是把它放在摇床上，还是在DEPC水中放转子，再到磁力搅拌器上？
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7楼2011-05-29 14:19:04
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gagalady

新虫 (正式写手)
当然是第一种了
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8楼2011-05-29 14:40:14
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475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励经验分享 2011-05-30 12:38:31
其实你泡EP管的水，高压一下就可以用的
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9楼2011-05-29 18:05:16
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cellline

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-30 12:38:44
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-29 06:42:53:
用来沉淀RNA的75％乙醇的DEPC水是用以下哪种方法配制的？
1.  100ml锥形瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压。提RNA时，再用100%的乙醇与DEPC水按3：1的体积比配置；
2.  先配置DEPC水，不用灭菌 ...

方法按第一种，但后面要做调整，不是将两种液体按体积混合就完事，正确的操作是：在经DEPC处理的有刻度（如100ml）的瓶子（我一般用血清瓶）加入新开瓶的纯乙醇至75ml，然后在加入经DEPC处理的水，至总体积100ml。
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10楼2011-05-29 23:37:09
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biofeixue

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by cellline at 2011-05-29 23:37:09:
方法按第一种，但后面要做调整，不是将两种液体按体积混合就完事，正确的操作是：在经DEPC处理的有刻度（如100ml）的瓶子（我一般用血清瓶）加入新开瓶的纯乙醇至75ml，然后在加入经DEPC处理的水，至总体积100 ...

你这不也是把两种液体混到一起吗？
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11楼2011-05-30 02:19:10
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biofeixue

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-05-29 18:05:16:
其实你泡EP管的水，高压一下就可以用的

哪不很脏吗？泡过EP管总会上面有脏东西吧？
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12楼2011-05-30 02:20:32
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by mamadexiao at 2011-05-29 10:56:33:
1%的DEPC,双蒸水或者超纯水吧,然后摇匀,我一般过夜摇,然后,拿去高压,就成了DEPC处理的水了,然后再和无水乙醇配成75%乙醇,洗RNA沉淀~

摇床上~
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13楼2011-05-30 08:44:59
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cellline

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励继续交流跑 2011-05-31 08:24:31
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-30 02:19:10:
你这不也是把两种液体混到一起吗？

不一样，75ml乙醇与25ml水混到一起没有100ml
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14楼2011-05-30 20:22:27
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475502411

铜虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-30 02:20:32:
哪不很脏吗？泡过EP管总会上面有脏东西吧？

不会的，新的EP管上也就是有空气中的一点菌之类的，其实水里也有的，没那么严格的要求
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15楼2011-05-31 19:14:45
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churchill87426

木虫 (正式写手)
★
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我是用将1ml DEPC加入1L的锥形瓶中，并用转子搅拌过夜。高温高压灭菌1小时使之降解。用RNA提取专用无水乙醇或新开瓶无水乙醇配置70-80%的乙醇溶液即可。俺就是这样做的，蛮好的。
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16楼2011-06-02 19:35:20
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跳动的RNA

禁言 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币-3, 屏蔽内容, 违规存档): 广告 2012-01-13 11:08:49
本帖内容被屏蔽
17楼2012-01-13 10:19:11
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schkk

至尊木虫 (正式写手)
★
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西瓜: DEPC水溶液的使用浓度很低的，高压灭菌没有问题 2012-01-20 14:11:44
常用有机溶剂除了甘油能高压灭菌外，其它的都不可以的，太危险了……
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18楼2012-01-19 23:33:31
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schkk

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+10): 新年快乐啊~特别红包一个^_^ 2012-01-24 00:33:04
引用回帖:
18楼: Originally posted by schkk at 2012-01-19 23:33:31:
常用有机溶剂除了甘油能高压灭菌外，其它的都不可以的，太危险了……

呵呵，谢谢板主，我的意思是酒精不能高压灭菌，忘了说DHPC处理的水可以灭菌了，嘿嘿，新年快乐啊
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19楼2012-01-22 22:37:23
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-01-31 11:35:31
引用回帖:
15楼: Originally posted by 475502411 at 2011-05-31 19:14:45:
不会的，新的EP管上也就是有空气中的一点菌之类的，其实水里也有的，没那么严格的要求

我们一般泡管子的水灭菌后一般倒掉。
新的EP管泡过后DEPC水也脏，特别是泡的管子多时。当然了，如果1L的DEPC水只泡一两个进口的EP管那肯定不脏，可以灭菌后使用。
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20楼2012-01-30 09:48:52
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cellline at 2011-05-29 23:37:09:
方法按第一种，但后面要做调整，不是将两种液体按体积混合就完事，正确的操作是：在经DEPC处理的有刻度（如100ml）的瓶子（我一般用血清瓶）加入新开瓶的纯乙醇至75ml，然后在加入经DEPC处理的水，至总体积100ml。

正解
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21楼2012-01-31 11:14:53
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梦与命

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by churchill87426 at 2011-06-02 19:35:20
我是用将1ml DEPC加入1L的锥形瓶中，并用转子搅拌过夜。高温高压灭菌1小时使之降解。用RNA提取专用无水乙醇或新开瓶无水乙醇配置70-80%的乙醇溶液即可。俺就是这样做的，蛮好的。

请问用DEPC配制后的无水乙醇需要过滤除菌吗？
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22楼2019-10-08 15:39:30
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135005588202楼
2011-05-29 07:19   回复  
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