应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DEPC水配制及用器烘问题？
121/2返回列表12下一页
查看: 3989  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

biofeixue

木虫 (著名写手)

[求助] DEPC水配制及用器烘问题？

　　DEPC水能不能在用前提前三天，按比例在双蒸水中加入DEPC,不搅拌，让它溶上三天，等看不到DEPC油滴后再用，这种方法效果好吗？用前再灭菌，能把RNAase 灭活吗？
　　用０.１%的DEPC水泡过的枪头后，把盛枪头的瓶子中的水倒干净，但有时很全部倒干净，因为怕DEPC水有毒，最后，在灭菌后总是看到里面还有一些水，请问我能不能在烘干时，把瓶口包有报纸的瓶子倒过来烘干？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-30 03:13:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
biofeixue(金币+5): 请问你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次吗？另外若烘2天不会有细菌进去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-30 03:13:52:
　　DEPC水能不能在用前提前三天，按比例在双蒸水中加入DEPC,不搅拌，让它溶上三天，等看不到DEPC油滴后再用，这种方法效果好吗？用前再灭菌，能把RNAase 灭活吗？
　　用０.１%的DEPC水泡过的枪头后，把盛枪头的 ...

DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式为C6H10O5，分子量为162.14，无色、澄清透明的液体。是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC不稳定，在水溶液中会分解成乙醇和二氧化碳， 25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。在水中的半衰期约为30min。

这个别说你提前让它溶上3天，提前溶3小时都值得商榷。但是经典实验手册上都是说浸泡过夜或12小时的。。。。这个确实有点小不理解

使用前高温降解DEPC。。。。这个问题不大，但是实际情况是即使你水倒的很干，灭完在60℃烘干也要2天左右才能彻底干。

水会把纸弄湿，外界RNase有机会污染
PS：但凡你自己觉得试验有问题的话，基本上它就是真的有问题。做一个严格的实验，真的很难。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-05-30 04:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

biofeixue

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-05-30 04:48:26:
DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式为C6H10O5，分子量为162.14，无色、澄清透明的液体。是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DE ...

我们这儿大家都用DEPC水泡EP管很多次。多次重复使用，你们泡EP管的DEPC水都是现配现用吗？请问你是怎么配的？
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-30 05:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 继续鼓励 2011-05-30 16:32:21
biofeixue(金币+2): 2011-06-07 08:15:56
参见分子克隆第三版

我是depc加进去就用搅拌子转，同时泡枪尖和管

菌是不怕的，怕的是RNas。

没灭过菌吗？灭菌也是用东西包着啊，一个不进去不可能，但是可以尽量减少外界污染的机会
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-30 10:42:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忘忧草_

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
biofeixue(金币+3): 2011-06-07 08:16:19
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-15 11:17:28
其实没那么严重，我一般做的都是DEPC水配好，搅拌10min，将枪头、ep管等泡在里面，置30℃，黑暗条件下，12 h；取出高压灭菌，烘干即可，没大问题。楼主嫌麻烦可以直接定购无RNase的枪头
赞一下(1人) 回复此楼
不将就
5楼2011-06-01 13:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

~AWA~

银虫 (小有名气)
想弱弱的问一句，枪头是泡完DEPC水之后装盒子里，还是说高压灭菌后再无菌条件下装盒子里呢？？？？？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-08 12:42:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)
前者
回复此楼
7楼2011-06-08 17:09:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cloverplm

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
1949stone(金币+3): 提醒到位 2011-08-15 11:17:53
引用回帖:
Originally posted by ~AWA~ at 2011-06-08 12:42:04:
想弱弱的问一句，枪头是泡完DEPC水之后装盒子里，还是说高压灭菌后再无菌条件下装盒子里呢？？？？？

最好选择泡完后再装了灭，泡完之后装也要注意，还是要在无RNA酶的环境中。泡的过程要在通风橱中进行，一般过夜泡，那个泡完剩的水你可以收集起来，用来以后擦拭提RNA的超净工作台台面。PS：DEPC神经毒性的哦，一定要戴好口罩。偶以前常做这个。其实最方便的就是买现成的不用泡的无RNA酶的Ep管。
赞一下(1人) 回复此楼
净——静——竞——进
8楼2011-07-25 20:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)
小疑问：在RT-PCR中，在大烧杯里DEPC浸泡枪头后拿去灭菌，要是用牛皮纸什么的封口，纸上的RNA酶怎么处理？这不是等于白处理了？
赞一下 回复此楼
9楼2011-08-15 10:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cloverplm at 2011-07-25 20:41:59:
最好选择泡完后再装了灭，泡完之后装也要注意，还是要在无RNA酶的环境中。泡的过程要在通风橱中进行，一般过夜泡，那个泡完剩的水你可以收集起来，用来以后擦拭提RNA的超净工作台台面。PS：DEPC神经毒性的哦，一 ...

这样的DEPC没分解，擦台面会对人体有毒;要是高压灭菌后的就分解了，起不到抑制RNA酶的作用，这不是一个矛盾么？
赞一下 回复此楼
10楼2011-08-15 10:29:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biofeixue 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭