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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DEPC水配制及用器烘问题？
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biofeixue

木虫 (著名写手)

[求助] DEPC水配制及用器烘问题？

　　DEPC水能不能在用前提前三天，按比例在双蒸水中加入DEPC,不搅拌，让它溶上三天，等看不到DEPC油滴后再用，这种方法效果好吗？用前再灭菌，能把RNAase 灭活吗？
　　用０.１%的DEPC水泡过的枪头后，把盛枪头的瓶子中的水倒干净，但有时很全部倒干净，因为怕DEPC水有毒，最后，在灭菌后总是看到里面还有一些水，请问我能不能在烘干时，把瓶口包有报纸的瓶子倒过来烘干？
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1楼2011-05-30 03:13:52
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
biofeixue(金币+5): 请问你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次吗？另外若烘2天不会有细菌进去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-30 03:13:52:
　　DEPC水能不能在用前提前三天，按比例在双蒸水中加入DEPC,不搅拌，让它溶上三天，等看不到DEPC油滴后再用，这种方法效果好吗？用前再灭菌，能把RNAase 灭活吗？
　　用０.１%的DEPC水泡过的枪头后，把盛枪头的 ...

DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式为C6H10O5，分子量为162.14，无色、澄清透明的液体。是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC不稳定，在水溶液中会分解成乙醇和二氧化碳， 25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。在水中的半衰期约为30min。

这个别说你提前让它溶上3天，提前溶3小时都值得商榷。但是经典实验手册上都是说浸泡过夜或12小时的。。。。这个确实有点小不理解

使用前高温降解DEPC。。。。这个问题不大，但是实际情况是即使你水倒的很干，灭完在60℃烘干也要2天左右才能彻底干。

水会把纸弄湿，外界RNase有机会污染
PS：但凡你自己觉得试验有问题的话，基本上它就是真的有问题。做一个严格的实验，真的很难。
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2楼2011-05-30 04:48:26
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普通回帖

biofeixue

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-05-30 04:48:26:
DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式为C6H10O5，分子量为162.14，无色、澄清透明的液体。是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DE ...

我们这儿大家都用DEPC水泡EP管很多次。多次重复使用，你们泡EP管的DEPC水都是现配现用吗？请问你是怎么配的？
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3楼2011-05-30 05:56:23
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 继续鼓励 2011-05-30 16:32:21
biofeixue(金币+2): 2011-06-07 08:15:56
参见分子克隆第三版

我是depc加进去就用搅拌子转，同时泡枪尖和管

菌是不怕的，怕的是RNas。

没灭过菌吗？灭菌也是用东西包着啊，一个不进去不可能，但是可以尽量减少外界污染的机会
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4楼2011-05-30 10:42:27
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忘忧草_

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
biofeixue(金币+3): 2011-06-07 08:16:19
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-15 11:17:28
其实没那么严重，我一般做的都是DEPC水配好，搅拌10min，将枪头、ep管等泡在里面，置30℃，黑暗条件下，12 h；取出高压灭菌，烘干即可，没大问题。楼主嫌麻烦可以直接定购无RNase的枪头
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不将就
5楼2011-06-01 13:48:32
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~AWA~

银虫 (小有名气)
想弱弱的问一句，枪头是泡完DEPC水之后装盒子里，还是说高压灭菌后再无菌条件下装盒子里呢？？？？？
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6楼2011-06-08 12:42:04
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cdl007

木虫 (正式写手)
前者
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7楼2011-06-08 17:09:11
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cloverplm

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
1949stone(金币+3): 提醒到位 2011-08-15 11:17:53
引用回帖:
Originally posted by ~AWA~ at 2011-06-08 12:42:04:
想弱弱的问一句，枪头是泡完DEPC水之后装盒子里，还是说高压灭菌后再无菌条件下装盒子里呢？？？？？

最好选择泡完后再装了灭，泡完之后装也要注意，还是要在无RNA酶的环境中。泡的过程要在通风橱中进行，一般过夜泡，那个泡完剩的水你可以收集起来，用来以后擦拭提RNA的超净工作台台面。PS：DEPC神经毒性的哦，一定要戴好口罩。偶以前常做这个。其实最方便的就是买现成的不用泡的无RNA酶的Ep管。
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净——静——竞——进
8楼2011-07-25 20:41:59
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256k

新虫 (正式写手)
小疑问：在RT-PCR中，在大烧杯里DEPC浸泡枪头后拿去灭菌，要是用牛皮纸什么的封口，纸上的RNA酶怎么处理？这不是等于白处理了？
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9楼2011-08-15 10:26:49
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256k

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cloverplm at 2011-07-25 20:41:59:
最好选择泡完后再装了灭，泡完之后装也要注意，还是要在无RNA酶的环境中。泡的过程要在通风橱中进行，一般过夜泡，那个泡完剩的水你可以收集起来，用来以后擦拭提RNA的超净工作台台面。PS：DEPC神经毒性的哦，一 ...

这样的DEPC没分解，擦台面会对人体有毒;要是高压灭菌后的就分解了，起不到抑制RNA酶的作用，这不是一个矛盾么？
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10楼2011-08-15 10:29:31
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