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biofeixue木虫 (著名写手)
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DEPC水配制及用器烘问题？
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DEPC水能不能在用前提前三天，按比例在双蒸水中加入DEPC,不搅拌，让它溶上三天，等看不到DEPC油滴后再用，这种方法效果好吗？用前再灭菌，能把RNAase 灭活吗？ 用０.１%的DEPC水泡过的枪头后，把盛枪头的瓶子中的水倒干净，但有时很全部倒干净，因为怕DEPC水有毒，最后，在灭菌后总是看到里面还有一些水，请问我能不能在烘干时，把瓶口包有报纸的瓶子倒过来烘干？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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5楼2011-06-01 13:48:32
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
biofeixue(金币+5): 请问你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次吗？另外若烘2天不会有细菌进去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
biofeixue(金币+5): 请问你是怎么配DEPC的？要每提一次RNA就配一次吗？另外若烘2天不会有细菌进去吧？ 2011-05-30 05:46:36
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-05-30 08:26:55
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DEPC即diethyl pyrocarbonate。分子式为C6H10O5，分子量为162.14，无色、澄清透明的液体。是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。 DEPC不稳定，在水溶液中会分解成乙醇和二氧化碳， 25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。在水中的半衰期约为30min。 这个别说你提前让它溶上3天，提前溶3小时都值得商榷。但是经典实验手册上都是说浸泡过夜或12小时的。。。。这个确实有点小不理解 使用前高温降解DEPC。。。。这个问题不大，但是实际情况是即使你水倒的很干，灭完在60℃烘干也要2天左右才能彻底干。 水会把纸弄湿，外界RNase有机会污染 PS：但凡你自己觉得试验有问题的话，基本上它就是真的有问题。做一个严格的实验，真的很难。 |
2楼2011-05-30 04:48:26
biofeixue
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3楼2011-05-30 05:56:23
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4楼2011-05-30 10:42:27
