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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 昆虫触角总RNA提取疑问
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含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] 昆虫触角总RNA提取疑问

我现在在提取蛾子触角的总RNA，采用的试剂是Trizol，提取后电泳检测，结果都是只有一条带，大概在900bp左右，已反复试验几次，得到的结果都是一样的，只有一条带900bp左右。电泳图见附图1.
为了验证我提取的产物是否为DNA，我同时提取了总DNA，电泳后发现有两条带，一条在2000bp以上，一条在在900bp左右。电泳图见附图2.
后来，我又用了柱式动物组织总RNA提取纯化试剂盒，按说明书的操作进行，最后提取的产物跑胶后也只有一条带，大小在2000bp以上，与总DNA电泳的上层条带大致位置相同。见图3.
根据得到的结果推测，两种RNA提取方法，可能只是提取出特定大小的基因组DNA。但我不明白，为什么按提RNA的方法只能提出DNA，还只有这特定的大小？RNA又在哪呢？
注：在提取的过程中，为了使裂解更充分，我用Trizol处理的时间为冰上静置半小时。为了使RNA沉淀更充分，我加异丙醇后，30℃温育30min。加氯仿后吸取的上清液是透明的，但异丙醇沉淀后就出现了黑色的杂质，看不到白色的RNA沉淀。
不明白是什么原因。 请有经验的帮忙分析一下，感激不尽！！！

图1



图2



图3
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努力，奋斗，拼搏。。。
1楼 2012-03-29 21:55:07
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
含羞草liu: 金币+1, ★有帮助 2012-04-25 14:27:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by 高飞12 at 2012-03-31 14:10:53:
我没有单独提取触角，但是经常提取小菜蛾幼虫的RNA，没有出现过以上现象，只是28s:18s差不多1:2。我个人认为你说“为了沉淀更充分，加异丙醇后，30℃温育30min”时间太久了吧，而且还是30°，我们实验室一般都是常 ...

非常同意！
加异丙醇沉淀一般是在冰上或者室温，30℃温度太高啦~首先是RNA容易降解，其次是不利于沉淀。30min有点久，一般5~10min就足够了。不过，最大的问题还是那个30℃！
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-02 11:32:37
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查看全部 13 个回答

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
太诡异了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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我就是我
2楼2012-03-30 00:49:01
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
光看大小未必正确，可以试试用DNA酶消化，看看是不是DNA哦。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-03-30 02:31:01
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高飞12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-04-02 11:30:02
含羞草liu: 金币+1 2012-04-25 14:26:24
我没有单独提取触角，但是经常提取小菜蛾幼虫的RNA，没有出现过以上现象，只是28s:18s差不多1:2。我个人认为你说“为了沉淀更充分，加异丙醇后，30℃温育30min”时间太久了吧，而且还是30°，我们实验室一般都是常温10min，RNA提取过程本来都要相对快速的，所以我觉得这步不大合理。个人意见~
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-31 14:10:53
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查看全部 13 个回答
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