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含羞草liu

新虫 (小有名气)

[求助] 昆虫触角总RNA提取疑问

我现在在提取蛾子触角的总RNA,采用的试剂是Trizol,提取后电泳检测,结果都是只有一条带,大概在900bp左右,已反复试验几次,得到的结果都是一样的,只有一条带900bp左右。电泳图见附图1.
为了验证我提取的产物是否为DNA,我同时提取了总DNA,电泳后发现有两条带,一条在2000bp以上,一条在在900bp左右。电泳图见附图2.
后来,我又用了柱式动物组织总RNA提取纯化试剂盒,按说明书的操作进行,最后提取的产物跑胶后也只有一条带,大小在2000bp以上,与总DNA电泳的上层条带大致位置相同。见图3.
根据得到的结果推测,两种RNA提取方法,可能只是提取出特定大小的基因组DNA。但我不明白,为什么按提RNA的方法只能提出DNA,还只有这特定的大小?RNA又在哪呢?
注:在提取的过程中,为了使裂解更充分,我用Trizol处理的时间为冰上静置半小时。为了使RNA沉淀更充分,我加异丙醇后,30℃温育30min。加氯仿后吸取的上清液是透明的,但异丙醇沉淀后就出现了黑色的杂质,看不到白色的RNA沉淀。
不明白是什么原因。 请有经验的帮忙分析一下,感激不尽!!!

图1



图2



图3
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖


含羞草liu: 金币+1, 有帮助 2012-04-25 14:27:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by 高飞12 at 2012-03-31 14:10:53:
我没有单独提取触角,但是经常提取小菜蛾幼虫的RNA,没有出现过以上现象,只是28s:18s差不多1:2。我个人认为你说“为了沉淀更充分,加异丙醇后,30℃温育30min”时间太久了吧,而且还是30°,我们实验室一般都是常 ...

非常同意!
加异丙醇沉淀一般是在冰上或者室温,30℃温度太高啦~首先是RNA容易降解,其次是不利于沉淀。30min有点久,一般5~10min就足够了。不过,最大的问题还是那个30℃!
7楼2012-04-02 11:32:37
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查看全部 13 个回答

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

太诡异了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
我就是我
2楼2012-03-30 00:49:01
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
光看大小未必正确,可以试试用DNA酶消化,看看是不是DNA哦。
3楼2012-03-30 02:31:01
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高飞12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流! 2012-04-02 11:30:02
含羞草liu: 金币+1 2012-04-25 14:26:24
我没有单独提取触角,但是经常提取小菜蛾幼虫的RNA,没有出现过以上现象,只是28s:18s差不多1:2。我个人认为你说“为了沉淀更充分,加异丙醇后,30℃温育30min”时间太久了吧,而且还是30°,我们实验室一般都是常温10min,RNA提取过程本来都要相对快速的,所以我觉得这步不大合理。个人意见~
4楼2012-03-31 14:10:53
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