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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] RNA提取结果,我提了好多次,传说中的高质量没出现

RNA提取结果,我提了好多次,快吐了,传说中的高质量没出现,大家帮我看看,那一次的结果能用来做5 RACE PCR

前面是5-212引物出的5端片段,后面是所有RNA电泳图,前面两个是上学期的,后面是最近一直失败提的.jpg
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晓学究

木虫 (著名写手)

你这个就是DNA污染加RNA降解,管子必须用进口的或泡过DEPC的国产的。操作一定在冰上进行,总之一点,要想尽办法减少RNase污染,另外,你跑的电泳时间是不是太久了。
锻炼,饮食,计划,幸福
9楼2013-03-27 22:25:43
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晓学究

木虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:15:44
你这个就是DNA污染加RNA降解,管子必须用进口的或泡过DEPC的国产的。操作一定在冰上进行,总之一点,要想尽办法减少RNase污染,另外,你跑的电泳时间是不是太久了。
锻炼,饮食,计划,幸福
10楼2013-03-27 22:26:05
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普通回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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fengyunqb: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-27 11:34:44
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-27 13:39:43
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:15:48
你从什么组织中提取RNA啊,如果是植物就要最幼嫩的,按说一般用Trizol提都没多大问题。一般我提了后就分装到负80度保存了
2楼2013-03-27 10:12:22
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bloodwar at 2013-03-27 10:12:22
你从什么组织中提取RNA啊,如果是植物就要最幼嫩的,按说一般用Trizol提都没多大问题。一般我提了后就分装到负80度保存了

鱼脑,那你看我哪一次的能够用来作5'race
3楼2013-03-27 11:34:37
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

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fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:01
重提吧
貌似六个中有3个是有DNA污染的,其他的降解了
用具一定要无RNA酶,如果是手动研磨的话尽量缩短研磨时间,不过你的是鱼脑的话应该不用研太久
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
4楼2013-03-27 11:58:22
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jinqimaggie

铁虫 (小有名气)

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fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:09
可以加RNAse INHIBITOR
5楼2013-03-27 13:09:00
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shangming

铜虫 (小有名气)

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哪一个也不行,用DEPC水重新提吧
6楼2013-03-27 13:51:35
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

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fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:27
dna污染比较严重,请问lz是用的什么提的,我建议换用invitrogen的TRIZol(注意买正品的),用这个的话,其实基本不需要加DNase的。
7楼2013-03-27 15:50:06
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:32
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:49
胰脏、脾脏、大脑等部位RNA酶较多,想得到好的RNA提取结果较难,我一般是取样后马上放入Trizol中,然后尽量加快抽提实验的速度,所有的耗材和试剂做到无RNase,实验结束后分装,留一管做检测,其他马上入-80冰箱。电泳检测的时候电压加大,快速跑完,否则电泳过程也会折腾RNA。
8楼2013-03-27 16:44:47
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