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soffy0214

铜虫 (小有名气)

[求助] 植物RNA提取电泳图，求解析！

植物RNA提取电泳图，求解析！提了很长时间，不是多条带就是边缘模糊带，不知道是降解还是电泳条件和胶没制好？以前我用氯仿只抽提一次，发现带很亮，而且有五条，后来就用氯仿抽提两次，出现三条带，可是边缘模糊。好像我一直以来跑的电泳带都是比较模糊的，不知道是什么原因？


[ Last edited by soffy0214 on 2012-7-10 at 21:54 ]
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1楼 2012-07-10 21:53:34
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lele1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正常就应该是3条带，前两条亮，最下面一条比较弱，条带模糊，可能是因为电泳时间过长，RNA有部分降解，要么是含有杂质。
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2楼2012-07-10 22:29:08
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xiaozhuhome

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 鼓励积极应助，解答问题 2012-07-13 16:16:00
soffy0214: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-07-13 19:32:59
看你的电泳结果，RNA没有问题的。感觉是电泳跑的不太好条带模糊。像是电泳液缓冲能力不太好，不知道是不是电泳液不新鲜导致。另外，你所说的5条带这里没有图就看不出来到底是怎么回事。RNA只要不降解，做一般实验是没有问题的。你的胶看起来是普通的胶，没有加变性剂，加入变性剂后，很容易看到28S是18S的两倍的关系，更加可以确定没有降解发生。如果实在不放心，可以再测一下OG，260/280如果在1.8到2.0之间就没有问题。超过2.0说明还是有降解。还有就是据我个人的经验，植物组织RNA不需要多次用氯仿抽提，因为氯仿在这里的作用，一个是去除痕量酚，另外要去除脂质，第三个作用就是增大有机相的比重，在实验中没有意外发生，抽提一次足矣。希望对你有帮助
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3楼2012-07-13 10:16:31
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dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-07-13 16:16:11
我跑过的RNA三条带或五条带的都有，因为组织中有叶绿体或线粒体的RNA也被提取出来了。不论几条带，判断标准是一样的，只要28S和18s两条带比较清晰，且亮度比接近1:1或2:1，而最小的5s比较弱的话，说明RNA提取质量还可以，再配合OD值来判断，就能确定RNA是否可用于后续试验。
楼主的电泳极有可能是胶的问题，建议重新配制电泳buffer和胶试试。另外，RNA电泳不能跑太长时间，指示剂移出加样孔大约2-3cm就可以看胶了，时间太长容易模糊，电压不能太大，4-5V/cm胶长就行。
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我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
4楼2012-07-13 14:02:42
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