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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA电泳上样量
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA电泳上样量

提取RNA之后，非变性琼脂糖凝胶电泳点样时，用多少的样，多少的loading buffer，问了很多人说法不一，具体多少效果好啊
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1楼2012-04-25 15:36:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zgb1982

木虫 (正式写手)
没人说清楚就自己设个梯度算啦，以后就知道不
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2楼2012-04-25 21:34:41
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phoenix.ren

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励 2012-04-28 10:24:59
根据我的经验，点1ul足够了。loading buffer有不同的选择，有6X，10X，2X的，根据样品体积算即可。
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5楼2012-04-28 09:50:25
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流，欢迎常来哦 2012-05-07 13:56:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-04 20:47:52:
剪组织的时候，要剪多大呢，绿豆大小可以吗，个别组织有没有什么特殊的要求啊，比如脂肪、肝脏之类的，我提了几次，电泳检测，浓度都很低，条带看不清楚，是不是我剪得组织量太少啊，而且我用的Trizol是师姐去年 ...

1,动物组织的话，大概0.1克就可以，加入TRAZOL 1毫升即可，建议用匀浆器研磨。
2，脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求（尽量别取脂肪），或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染，放在4℃条件应该没什么问题。要是有污染的话，那就不好说了。

建议先优化1、2两个条件（按照我说的试一试），如果不行的话，在考虑新定制TRAZOL。

做分子就这样，相信一句话：战胜自己！
祝君好运！
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勤能补拙
10楼2012-05-05 09:53:31
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普通回帖

桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-04-25 21:34:41:
没人说清楚就自己设个梯度算啦，以后就知道不

我加了3微的样 3微的buffer 这样可以不?
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3楼2012-04-28 09:08:33
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-28 10:24:41
可以，但我告诉你，一般你是有marker对比的，如果你是想看具体标准的RNA图片，那你得和marker的上样量相同，因为marker的浓度规格一般是75ng/5ul，这个你可以参照你用marker的说明书，所以你标准相同后好比了，希望你实验顺利啊
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我努力我奋斗我成功
4楼2012-04-28 09:42:47
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-28 09:42:47:
可以，但我告诉你，一般你是有marker对比的，如果你是想看具体标准的RNA图片，那你得和marker的上样量相同，因为marker的浓度规格一般是75ng/5ul，这个你可以参照你用marker的说明书，所以你标准相同后好比了，希 ...

谢谢啦，我加的样3微，buffer3微，maker6微，这样可以吗
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6楼2012-05-04 10:54:38
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by phoenix.ren at 2012-04-28 09:50:25:
根据我的经验，点1ul足够了。loading buffer有不同的选择，有6X，10X，2X的，根据样品体积算即可。

谢谢，buffer是不是要多加点啊
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7楼2012-05-04 12:45:06
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 虫虫今天很活跃哦，谢谢对本版的支持 2012-05-04 14:00:57
这个的话 得看楼主RNA提取的浓度！！  我们做的时候一般都是用20微升溶解提取的RNA，电泳的时候加入1微升的10*LOading Buffer,加3微升的RNA样品，混合起来电泳，电压120V，电泳20分钟即可。
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勤能补拙
8楼2012-05-04 12:51:14
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:51:14:
这个的话 得看楼主RNA提取的浓度！！  我们做的时候一般都是用20微升溶解提取的RNA，电泳的时候加入1微升的10*LOading Buffer,加3微升的RNA样品，混合起来电泳，电压120V，电泳20分钟即可。

剪组织的时候，要剪多大呢，绿豆大小可以吗，个别组织有没有什么特殊的要求啊，比如脂肪、肝脏之类的，我提了几次，电泳检测，浓度都很低，条带看不清楚，是不是我剪得组织量太少啊，而且我用的Trizol是师姐去年剩的，会有影响吗，有保质期的吗？好困惑啊。。。。。
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9楼2012-05-04 20:47:52
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