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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA电泳上样量

提取RNA之后,非变性琼脂糖凝胶电泳点样时,用多少的样,多少的loading buffer,问了很多人说法不一,具体多少效果好啊
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zgb1982

木虫 (正式写手)

没人说清楚就自己设个梯度算啦,以后就知道不
2楼2012-04-25 21:34:41
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phoenix.ren

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励 2012-04-28 10:24:59
根据我的经验,点1ul足够了。loading buffer有不同的选择,有6X,10X,2X的,根据样品体积算即可。
5楼2012-04-28 09:50:25
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流,欢迎常来哦 2012-05-07 13:56:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-04 20:47:52:
剪组织的时候,要剪多大呢,绿豆大小可以吗,个别组织有没有什么特殊的要求啊,比如脂肪、肝脏之类的,我提了几次,电泳检测,浓度都很低,条带看不清楚,是不是我剪得组织量太少啊,而且我用的Trizol是师姐去年 ...

1,动物组织的话,大概0.1克就可以,加入TRAZOL 1毫升即可,建议用匀浆器研磨。
2,脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求(尽量别取脂肪),或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染,放在4℃条件应该没什么问题。要是有污染的话,那就不好说了。

建议先优化1、2两个条件(按照我说的试一试),如果不行的话,在考虑新定制TRAZOL。

做分子就这样,相信一句话:战胜自己!
祝君好运!
勤能补拙
10楼2012-05-05 09:53:31
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普通回帖

桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-04-25 21:34:41:
没人说清楚就自己设个梯度算啦,以后就知道不

我加了3微的样 3微的buffer 这样可以不?
3楼2012-04-28 09:08:33
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-28 10:24:41
可以,但我告诉你,一般你是有marker对比的,如果你是想看具体标准的RNA图片,那你得和marker的上样量相同,因为marker的浓度规格一般是75ng/5ul,这个你可以参照你用marker的说明书,所以你标准相同后好比了,希望你实验顺利啊
我努力我奋斗我成功
4楼2012-04-28 09:42:47
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-28 09:42:47:
可以,但我告诉你,一般你是有marker对比的,如果你是想看具体标准的RNA图片,那你得和marker的上样量相同,因为marker的浓度规格一般是75ng/5ul,这个你可以参照你用marker的说明书,所以你标准相同后好比了,希 ...

谢谢啦,我加的样3微,buffer3微,maker6微,这样可以吗
6楼2012-05-04 10:54:38
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by phoenix.ren at 2012-04-28 09:50:25:
根据我的经验,点1ul足够了。loading buffer有不同的选择,有6X,10X,2X的,根据样品体积算即可。

谢谢,buffer是不是要多加点啊
7楼2012-05-04 12:45:06
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 虫虫今天很活跃哦,谢谢对本版的支持 2012-05-04 14:00:57
这个的话 得看楼主RNA提取的浓度!!  我们做的时候一般都是用20微升溶解提取的RNA,电泳的时候加入1微升的10*LOading Buffer,加3微升的RNA样品,混合起来电泳,电压120V,电泳20分钟即可。
勤能补拙
8楼2012-05-04 12:51:14
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:51:14:
这个的话 得看楼主RNA提取的浓度!!  我们做的时候一般都是用20微升溶解提取的RNA,电泳的时候加入1微升的10*LOading Buffer,加3微升的RNA样品,混合起来电泳,电压120V,电泳20分钟即可。

剪组织的时候,要剪多大呢,绿豆大小可以吗,个别组织有没有什么特殊的要求啊,比如脂肪、肝脏之类的,我提了几次,电泳检测,浓度都很低,条带看不清楚,是不是我剪得组织量太少啊,而且我用的Trizol是师姐去年剩的,会有影响吗,有保质期的吗?好困惑啊。。。。。
9楼2012-05-04 20:47:52
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