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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话,大概0.1克就可以,加入TRAZOL 1毫升即可,建议用匀浆器研磨。
2,脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求(尽量别取脂肪),或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染,放在4℃条 ...

补一句:操作过程尽量严格,避免灰尘接触,戴口罩,勤换手套。低温操作(冰盒),尽量严格吧!!!
勤能补拙
11楼2012-05-05 09:59:33
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话,大概0.1克就可以,加入TRAZOL 1毫升即可,建议用匀浆器研磨。
2,脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求(尽量别取脂肪),或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染,放在4℃条 ...

是的,谢谢啦,我做的实验是先提取垂体的RNA,再反转录,然后做RACE,克隆生长激素CDNA全长,其他14个组织的RNA是用作定量用的,还有一部分是克隆内含子的,不知道做这么多,能不能毕业啊,觉得有点少,可是又不知道还能做些什么,就是这些实验,还不知道什么时候能做完呢。。。。
12楼2012-05-05 14:26:25
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-05 14:26:25:
是的,谢谢啦,我做的实验是先提取垂体的RNA,再反转录,然后做RACE,克隆生长激素CDNA全长,其他14个组织的RNA是用作定量用的,还有一部分是克隆内含子的,不知道做这么多,能不能毕业啊,觉得有点少,可是又不知 ...

哥们儿,咱们真有缘!!我是提取植物的RNA,然后在反转录,做RACE,克隆一个基因的全长基因,构建原核表达载体,最后在表达!!  
加油吧小伙儿,RACE可不太好做,我这正做着呢,已经2个月了,没出啥东西。   加油吧!!!!好运-----
勤能补拙
13楼2012-05-05 17:33:30
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话,大概0.1克就可以,加入TRAZOL 1毫升即可,建议用匀浆器研磨。
2,脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求(尽量别取脂肪),或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染,放在4℃条 ...

0.1克是多少啊,是绿豆那么大吗,为什么我提的RNA总降解呢,降解主要是剪组织和匀浆注意好了就行吗,电泳时电压多少合适啊,有没有提RNA的详细操作步骤呢,求步骤啊,
14楼2012-05-07 09:45:18
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流,多多应助 2012-05-08 13:34:05
引用回帖:
14楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-07 09:45:18:
0.1克是多少啊,是绿豆那么大吗,为什么我提的RNA总降解呢,降解主要是剪组织和匀浆注意好了就行吗,电泳时电压多少合适啊,有没有提RNA的详细操作步骤呢,求步骤啊,

差不多跟绿豆粒大小,提RNA时一定要注意。环境洁净很重要,提取要戴口罩,勤换手套。电泳120V,20分钟即可。
步骤:1、1毫升TRIZOL研磨充分组织后倒入处理过的1.5毫升离心管,加入200微升氯仿,12000g离心15分钟。
2、吸取上清液(约500微升)加入等体积(500微升)异丙醇,室温静置2-3分钟,12000g离心10分钟。
3、弃上清,加入1毫升DEPC处理过的水配置的75%乙醇,振荡混匀,7500g离心5分钟。
4、弃上清(尽量把液体弃净,室温挥发2-3分钟至离心管中没有明显液体残留)
5、加入20-30微升DEPC处理过的水,溶解RNA,立即放入-80℃冰箱储藏。

加油,RNA一般很好提取!  祝君好运!
勤能补拙
15楼2012-05-07 18:08:11
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yiyi12

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-08 13:34:17
我们标准用都是用6Xbuffer:RNA=1:3.不过不一定。我用buffer都是随机点一个个小点,RNA用2ul。
16楼2012-05-07 20:45:02
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 17:33:30:
哥们儿,咱们真有缘!!我是提取植物的RNA,然后在反转录,做RACE,克隆一个基因的全长基因,构建原核表达载体,最后在表达!!  
加油吧小伙儿,RACE可不太好做,我这正做着呢,已经2个月了,没出啥东西。   加 ...

RACE很难做的吗,我还没有做到呢,现在RNA还没提好呢,着急啊,现在在做RT PCR,引物还没设计好,郁闷,真不是学生物的料。。。。。。
17楼2012-05-08 19:21:45
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-08 19:21:45:
RACE很难做的吗,我还没有做到呢,现在RNA还没提好呢,着急啊,现在在做RT PCR,引物还没设计好,郁闷,真不是学生物的料。。。。。。

加油,我都快毕业了,还没出东西!!  急呀!!一起加油!
勤能补拙
18楼2012-05-08 20:48:38
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yufangcui

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-04 12:45:06
谢谢,buffer是不是要多加点啊...

请问我提的浓度为233ng/ul,跑的时候要加多少的量呢?谢谢
19楼2012-12-03 23:13:04
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疯子J-F

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

其实提好RNA后,没必要跑胶检测,本来含量就少,可以直接批,用rt-pcr的产物跑胶,当然这对于rna提的较熟练者是比较合适的,毕竟反转录试剂盒不便宜,希望有所帮助……
20楼2013-07-22 22:28:07
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