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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA电泳上样量
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话，大概0.1克就可以，加入TRAZOL 1毫升即可，建议用匀浆器研磨。
2，脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求（尽量别取脂肪），或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染，放在4℃条 ...

补一句：操作过程尽量严格，避免灰尘接触，戴口罩，勤换手套。低温操作（冰盒），尽量严格吧！！！
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勤能补拙
11楼2012-05-05 09:59:33
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话，大概0.1克就可以，加入TRAZOL 1毫升即可，建议用匀浆器研磨。
2，脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求（尽量别取脂肪），或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染，放在4℃条 ...

是的，谢谢啦，我做的实验是先提取垂体的RNA,再反转录，然后做RACE,克隆生长激素CDNA全长，其他14个组织的RNA是用作定量用的，还有一部分是克隆内含子的，不知道做这么多，能不能毕业啊，觉得有点少，可是又不知道还能做些什么，就是这些实验，还不知道什么时候能做完呢。。。。
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12楼2012-05-05 14:26:25
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-05 14:26:25:
是的，谢谢啦，我做的实验是先提取垂体的RNA,再反转录，然后做RACE,克隆生长激素CDNA全长，其他14个组织的RNA是用作定量用的，还有一部分是克隆内含子的，不知道做这么多，能不能毕业啊，觉得有点少，可是又不知 ...

哥们儿，咱们真有缘！！我是提取植物的RNA，然后在反转录，做RACE，克隆一个基因的全长基因，构建原核表达载体，最后在表达！！  
加油吧小伙儿，RACE可不太好做，我这正做着呢，已经2个月了，没出啥东西。   加油吧！！！！好运-----
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勤能补拙
13楼2012-05-05 17:33:30
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话，大概0.1克就可以，加入TRAZOL 1毫升即可，建议用匀浆器研磨。
2，脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求（尽量别取脂肪），或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染，放在4℃条 ...

0.1克是多少啊，是绿豆那么大吗，为什么我提的RNA总降解呢，降解主要是剪组织和匀浆注意好了就行吗，电泳时电压多少合适啊，有没有提RNA的详细操作步骤呢，求步骤啊，
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14楼2012-05-07 09:45:18
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流，多多应助 2012-05-08 13:34:05
引用回帖:
14楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-07 09:45:18:
0.1克是多少啊，是绿豆那么大吗，为什么我提的RNA总降解呢，降解主要是剪组织和匀浆注意好了就行吗，电泳时电压多少合适啊，有没有提RNA的详细操作步骤呢，求步骤啊，

差不多跟绿豆粒大小，提RNA时一定要注意。环境洁净很重要，提取要戴口罩，勤换手套。电泳120V,20分钟即可。
步骤：1、1毫升TRIZOL研磨充分组织后倒入处理过的1.5毫升离心管，加入200微升氯仿，12000g离心15分钟。
2、吸取上清液（约500微升）加入等体积（500微升）异丙醇，室温静置2-3分钟，12000g离心10分钟。
3、弃上清，加入1毫升DEPC处理过的水配置的75%乙醇，振荡混匀，7500g离心5分钟。
4、弃上清（尽量把液体弃净，室温挥发2-3分钟至离心管中没有明显液体残留）
5、加入20-30微升DEPC处理过的水，溶解RNA，立即放入-80℃冰箱储藏。

加油，RNA一般很好提取！  祝君好运！
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勤能补拙
15楼2012-05-07 18:08:11
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yiyi12

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-08 13:34:17
我们标准用都是用6Xbuffer：RNA=1:3.不过不一定。我用buffer都是随机点一个个小点，RNA用2ul。
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16楼2012-05-07 20:45:02
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 17:33:30:
哥们儿，咱们真有缘！！我是提取植物的RNA，然后在反转录，做RACE，克隆一个基因的全长基因，构建原核表达载体，最后在表达！！  
加油吧小伙儿，RACE可不太好做，我这正做着呢，已经2个月了，没出啥东西。   加 ...

RACE很难做的吗，我还没有做到呢，现在RNA还没提好呢，着急啊，现在在做RT PCR,引物还没设计好，郁闷，真不是学生物的料。。。。。。
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17楼2012-05-08 19:21:45
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-08 19:21:45:
RACE很难做的吗，我还没有做到呢，现在RNA还没提好呢，着急啊，现在在做RT PCR,引物还没设计好，郁闷，真不是学生物的料。。。。。。

加油，我都快毕业了，还没出东西！！  急呀！！一起加油！
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勤能补拙
18楼2012-05-08 20:48:38
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yufangcui

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-04 12:45:06
谢谢，buffer是不是要多加点啊...

请问我提的浓度为233ng/ul，跑的时候要加多少的量呢？谢谢
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19楼2012-12-03 23:13:04
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疯子J-F

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

其实提好RNA后，没必要跑胶检测，本来含量就少，可以直接批，用rt-pcr的产物跑胶，当然这对于rna提的较熟练者是比较合适的，毕竟反转录试剂盒不便宜，希望有所帮助……
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20楼2013-07-22 22:28:07
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