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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

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[求助] 提取RNA电泳上样量

提取RNA之后，非变性琼脂糖凝胶电泳点样时，用多少的样，多少的loading buffer，问了很多人说法不一，具体多少效果好啊

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1楼2012-04-25 15:36:25

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wushuwei1104

银虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流，多多应助 2012-05-08 13:34:05

引用回帖:

14楼: Originally posted by 桐苇铅铅 at 2012-05-07 09:45:18:
0.1克是多少啊，是绿豆那么大吗，为什么我提的RNA总降解呢，降解主要是剪组织和匀浆注意好了就行吗，电泳时电压多少合适啊，有没有提RNA的详细操作步骤呢，求步骤啊，

差不多跟绿豆粒大小，提RNA时一定要注意。环境洁净很重要，提取要戴口罩，勤换手套。电泳120V,20分钟即可。
步骤：1、1毫升TRIZOL研磨充分组织后倒入处理过的1.5毫升离心管，加入200微升氯仿，12000g离心15分钟。
2、吸取上清液（约500微升）加入等体积（500微升）异丙醇，室温静置2-3分钟，12000g离心10分钟。
3、弃上清，加入1毫升DEPC处理过的水配置的75%乙醇，振荡混匀，7500g离心5分钟。
4、弃上清（尽量把液体弃净，室温挥发2-3分钟至离心管中没有明显液体残留）
5、加入20-30微升DEPC处理过的水，溶解RNA，立即放入-80℃冰箱储藏。

加油，RNA一般很好提取！祝君好运！