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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA电泳上样量

提取RNA之后，非变性琼脂糖凝胶电泳点样时，用多少的样，多少的loading buffer，问了很多人说法不一，具体多少效果好啊
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1楼2012-04-25 15:36:25
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-04-25 21:34:41:
没人说清楚就自己设个梯度算啦，以后就知道不

我加了3微的样 3微的buffer 这样可以不?
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3楼2012-04-28 09:08:33
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-04-28 09:42:47:
可以，但我告诉你，一般你是有marker对比的，如果你是想看具体标准的RNA图片，那你得和marker的上样量相同，因为marker的浓度规格一般是75ng/5ul，这个你可以参照你用marker的说明书，所以你标准相同后好比了，希 ...

谢谢啦，我加的样3微，buffer3微，maker6微，这样可以吗
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6楼2012-05-04 10:54:38
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by phoenix.ren at 2012-04-28 09:50:25:
根据我的经验，点1ul足够了。loading buffer有不同的选择，有6X，10X，2X的，根据样品体积算即可。

谢谢，buffer是不是要多加点啊
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7楼2012-05-04 12:45:06
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-04 12:51:14:
这个的话 得看楼主RNA提取的浓度！！  我们做的时候一般都是用20微升溶解提取的RNA，电泳的时候加入1微升的10*LOading Buffer,加3微升的RNA样品，混合起来电泳，电压120V，电泳20分钟即可。

剪组织的时候，要剪多大呢，绿豆大小可以吗，个别组织有没有什么特殊的要求啊，比如脂肪、肝脏之类的，我提了几次，电泳检测，浓度都很低，条带看不清楚，是不是我剪得组织量太少啊，而且我用的Trizol是师姐去年剩的，会有影响吗，有保质期的吗？好困惑啊。。。。。
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9楼2012-05-04 20:47:52
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话，大概0.1克就可以，加入TRAZOL 1毫升即可，建议用匀浆器研磨。
2，脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求（尽量别取脂肪），或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染，放在4℃条 ...

是的，谢谢啦，我做的实验是先提取垂体的RNA,再反转录，然后做RACE,克隆生长激素CDNA全长，其他14个组织的RNA是用作定量用的，还有一部分是克隆内含子的，不知道做这么多，能不能毕业啊，觉得有点少，可是又不知道还能做些什么，就是这些实验，还不知道什么时候能做完呢。。。。
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12楼2012-05-05 14:26:25
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 09:53:31:
1,动物组织的话，大概0.1克就可以，加入TRAZOL 1毫升即可，建议用匀浆器研磨。
2，脂肪、肝脏的话操作时没有什么特殊要求（尽量别取脂肪），或是取脂肪少的部位提取RNA。
3、TRIZOL的话如果没有污染，放在4℃条 ...

0.1克是多少啊，是绿豆那么大吗，为什么我提的RNA总降解呢，降解主要是剪组织和匀浆注意好了就行吗，电泳时电压多少合适啊，有没有提RNA的详细操作步骤呢，求步骤啊，
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14楼2012-05-07 09:45:18
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桐苇铅铅

新虫 (初入文坛)
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13楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-05-05 17:33:30:
哥们儿，咱们真有缘！！我是提取植物的RNA，然后在反转录，做RACE，克隆一个基因的全长基因，构建原核表达载体，最后在表达！！  
加油吧小伙儿，RACE可不太好做，我这正做着呢，已经2个月了，没出啥东西。   加 ...

RACE很难做的吗，我还没有做到呢，现在RNA还没提好呢，着急啊，现在在做RT PCR,引物还没设计好，郁闷，真不是学生物的料。。。。。。
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17楼2012-05-08 19:21:45
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