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木左左

银虫 (正式写手)

[求助] RNA提取以及gDNA去除

以cDNA为模板克隆目的基因。
材料:玉米未成熟的雌雄穗。
方法和试剂:trizol(英俊)Dnase(omega)
问题:RNA质量不是很好,量少;DNA去除不干净,有残留;不知道自己提的RNA质量过关吗?

不太清楚我提取的RNA的质量如何,自己感觉还可以









未去除DNA
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
木左左: 金币+1 2012-08-26 22:14:30
对于普通反转录,你的RNA还蛮好的,但是在反转录前需要用DNA酶处理,消化掉DNA哈。
2楼2012-08-25 14:47:20
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木左左

银虫 (正式写手)

求大家多帮帮忙忙
3楼2012-08-26 22:14:43
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liuanjun88

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你提的RNA反转录为CDNA应该没什么问题 完全可以以CDNA为模板进行目的的基因的克隆。我提的条带还没你的好都能做
Any restrictions, are from his heart began.
4楼2012-08-27 00:30:39
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木左左

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuanjun88 at 2012-08-27 00:30:39
你提的RNA反转录为CDNA应该没什么问题 完全可以以CDNA为模板进行目的的基因的克隆。我提的条带还没你的好都能做

可是我没有得到cDNA啊?内参扩不出来,直接跑cDNA也不是弥散的带,只在200bp那有很亮的带
5楼2012-08-27 09:05:41
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木左左

银虫 (正式写手)

我没有扩增出cDNA条带,直接跑cDNA也不是弥散的带
6楼2012-08-27 09:06:35
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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
RNA都提好了的话,建议用后续的gDNA去除的cDNA合成试剂盒,天根公司就有,名字是Fast Quant cDNA kit,建议你问问。
在路上~~Marketing!
7楼2012-08-28 09:13:56
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fenghuang2003

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

确定逆转录试剂没有出问题?应该不是RNA的问题,想去除DNA的话TAKARA有专门试剂盒一步到位逆转录不错,可以试试!
8楼2012-11-12 22:05:27
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jasmine-rj

银虫 (小有名气)

RNA提得挺好的,可能反转录试剂盒有些问题吧,建议做反转录的时候做一个阴性对照(不加反转录酶),这样在后续克隆的时候可以验证是否是由cDNA扩增得到的片段,是否混有了gDNA.
9楼2012-11-12 22:16:28
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