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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » rna终于提取出来了，可是反转录pcr（rt pcr）没有条带
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johnny4890

新虫 (小有名气)

[交流] rna终于提取出来了，可是反转录pcr（rt pcr）没有条带 已有7人参与

rna电泳图

（左边的是试剂盒提的，右边是TRIzol提的）
问题是做反转录pcr的时候做了两次都没有条带，只有对照组（基因级dna）有条带。
反转录的试剂盒是transgen的。
求助高手。
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1楼 2012-05-06 14:43:01
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txw87

木虫 (小有名气)
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西瓜: 金币+2, Good！ 2012-05-08 18:58:39
西瓜: 回帖置顶 2012-05-08 18:58:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by johnny4890 at 2012-05-06 21:36:44:
我有oligo dT（18）和GSP都做了反转录，都没有条带。杯具了。

嗯，我觉得你应该做一个参比基因的pcr说实在的，你的提取试剂盒应该是qiagen的吧，我用的提取试剂盒和反转录试剂盒和你一样，看你的条带没道理做不出来的。另外2楼说的也很重要，你应该参考

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2012-05-06 21:57:35
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bbwalkman

木虫 (小有名气)
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西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-06 19:17:37
你要看看你的引物是根据什么设计的，因为RNA和你的基因组的序列不是完全一样的，引物缺少了内含子序列，所以做反转录PCR的时候要根据你的RNA重新设计你的引物的。
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2楼2012-05-06 16:47:07
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txw87

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是用哪种引物进行反转录的？看你的RNA电泳条带，RNA是有部分降解的。这种情况应该用Random Primer或GSP引物进行反转录。
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3楼2012-05-06 17:02:01
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼2012-05-06 21:31:31
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johnny4890

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by txw87 at 2012-05-06 17:02:01:
你是用哪种引物进行反转录的？看你的RNA电泳条带，RNA是有部分降解的。这种情况应该用Random Primer或GSP引物进行反转录。

我有oligo dT（18）和GSP都做了反转录，都没有条带。杯具了。
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5楼2012-05-06 21:36:44
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bbwalkman

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基因组DNA引物和你RNA的引物可能是不一样的。。。注意哦楼主。。RNA是少内含子的
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6楼2012-05-06 21:40:10
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txw87

木虫 (小有名气)
★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-07 13:37:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by johnny4890 at 2012-05-06 21:36:44:
我有oligo dT（18）和GSP都做了反转录，都没有条带。杯具了。

嗯，我觉得你应该做一个参比基因的pcr。说实在的，你的提取试剂盒应该是qiagen的吧，我用的提取试剂盒和反转录试剂盒和你一样，看你的条带没道理做不出来的。另外2楼说的也很重要，你应该参考

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2012-05-06 21:58:08
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johnny4890

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-05-06 21:40:10:
基因组DNA引物和你RNA的引物可能是不一样的。。。注意哦楼主。。RNA是少内含子的

根据ncbi，内含子在中间，只有一个，所以引物是一样的吧。
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9楼2012-05-07 17:17:23
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johnny4890

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by txw87 at 2012-05-06 21:58:08:
嗯，我觉得你应该做一个参比基因的pcr。说实在的，你的提取试剂盒应该是qiagen的吧，我用的提取试剂盒和反转录试剂盒和你一样，看你的条带没道理做不出来的。另外2楼说的也很重要，你应该参考

是的，qiagen的RNeasy mini kit,什么参比基因啊？
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10楼2012-05-07 17:29:02
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